[發明專利]用于哮喘個體化用藥基因檢測的擴增引物組及探針、檢測試劑盒、使用方法

有效

• 申請號: 202210375807.8
• 申請日: 2022-04-11
• 公開（公告）號: CN114592054B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 郭建成;占閩寧;馮帥升;王丙順;朱丹丹;孫曉曉;張悅;史健翔;許紅恩;劉海芳;薛夏;張靜;柳丹華;秦亞平;薛濱雨
• 申請（專利權）人: 鄭州大學;河南申友醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11;C12Q1/6844
• 代理公司: 北京衛智易創專利代理事務所(普通合伙) 16015
• 代理人: 朱春野

本發明公開了用于哮喘個體化用藥基因檢測的擴增引物組及探針、檢測試劑盒、使用方法；擴增引物組及探針包括：ADRB2?rs1042713野生型正向引物ADRB2_F1、ADRB2?rs1042713突變型正向引物ADRB2_F2、ADRB2?rs1042713共用反向引物ADRB2_R、ADRB2?rs1042713共用探針ADRB2_P；GLCCI1?rs37973野生型正向引物GLCCI1_F1、GLCCI1?rs37973突變型正向引物GLCCI1_F2、GLCCI1?rs37973共用反向引物GLCCI1_R、GLCCI1?rs37973共用探針GLCCI1_P；CRHR2?rs7793837野生型正向引物CRHR2_F1、突變型正向引物CRHR2_F2、共用反向引物CRHR2_R、共用探針CRHR2_P；擴增引物組具有良好的擴增特異性，檢測靈敏度高、檢測時間短，檢測成本低。

技術領域

本申請屬于基因工程技術領域，具體涉及用于哮喘個體化用藥基因檢測的擴增引物組及探針、檢測試劑盒、使用方法。

背景技術

哮喘(Asthma)，又稱氣喘，是一種常見的呼吸道慢性炎癥疾病，主要特征是多變和復發的癥狀、可逆性氣流阻塞和支氣管痙攣。常見癥狀表現為喘息、咳嗽、胸腔緊迫、胸悶和呼吸困難。統計數據表明，2018年我國20歲以上人群哮喘患病率為4.2％，患者總數達4570萬人，并且超過七成的患者未被診斷。

目前尚無治療哮喘的特效辦法，但堅持長期規范化治療可使哮喘癥狀得到良好控制，減少復發甚至不再發作。市面上常用的抗哮喘藥物主要有六大類，包括糖皮質激素類、β2受體激動劑、白三烯調節劑、茶堿類藥物、抗膽堿藥物、IgE抗體和酮替芬。但是，哮喘的治療效果和不良反應在個體間存在很大的差異，造成這些差異的主要原因是每個人攜帶基因的不同。例如，ADRB2基因位于第五號染色體5q31-32上，編碼β2腎上腺素能受體，其rs1042713位點的多態性會影響患者對β2受體激動劑的治療效果，其中AG和GG基因型患者對β2受體激動劑的反應明顯高于AA基因型患者。在中國，攜帶AA基因型的患者高達32.1％，對于這些患者應盡量避免沙丁胺醇等β2受體激動劑的使用，更換其他藥物。同時，促腎上腺皮質素釋放激素受體2由CRHR2基因編碼，其rs7793837位點的多態性也會影響患者對β2受體激動劑的反應，研究表明，與攜帶TT和TA基因型的患者相比，攜帶AA基因型的患者在接受短效β2受體拮抗劑治療時有更好的反應。另外GLCCI1?rs37973位點的多態性也影響著哮喘患者對糖皮質激素類藥物的反應，AG和GG基因型患者在接受吸入性糖皮質激素治療時發生不良反應風險的概率明顯高于AA基因型患者。

目前大多研究集中于哮喘易感基因檢測試劑盒的開發，抗哮喘藥物相關基因的研究較為匱乏。例如，中國專利CN113215245A公開的一種用于兒童哮喘個體化用藥的基因檢測試劑盒及其應用，通過二代測序的方法，檢測了兒童哮喘個體化用藥的31個相關基因，雖然該方法精準度高，但是時效性較差、成本較高，且檢測項目較為冗余。另外，中國專利CN109837339A公開了用于兒童安全用藥相關基因檢測的引物組、探針組、試劑盒及方法，通過TaqMAN-MGB探針分型技術檢測了GLCCI1?rs37973位點的多態性，雖然該方法簡單快速，但僅檢測了一個與哮喘用藥相關的位點，不夠全面。

發明內容

有鑒于此，一方面，一些實施例公開了用于哮喘個體化用藥基因檢測的擴增引物組及探針，包括：ADRB2-rs1042713位點的ARMS引物組及探針、GLCCI1-rs37973位點的ARMS引物組及探針和CRHR2-rs7793837的ARMS引物組及探針；其中，

所述ADRB2-rs1042713位點的ARMS引物組及探針包括：

ADRB2-rs1042713野生型正向引物，其序列如SEQ?ID?NO：01所示；

ADRB2-rs1042713突變型正向引物，其序列如SEQ?ID?NO：02所示；