[發明專利]殺蟲基因和使用方法

在審

• 申請號: 202210372692.7
• 申請日: 2016-04-15
• 公開（公告）號: CN114644689A
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: J·帕克斯;K·B·羅伯茨;R·E·賽耶
• 申請（專利權）人: 農業生物群落股份有限公司
• 主分類號: C07K14/325
• 分類號: C07K14/325;C12N15/32;A01N63/23;A01N37/46;A01P7/04;A01P1/00;A01P5/00;A01H5/10;A01H6/46;A01H6/20;A01H6/82;A01H6/14;A01H6/60;A01H6/54
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 陳曉娜

提供了具有殺蟲活性的組合物及其使用方法。組合物包括具有殺蟲活性的分離的和重組的多肽、編碼所述多肽的重組的合成的核酸分子、包含所述核酸分子的DNA構建體和載體、包含所述載體的宿主細胞，以及針對所述多肽的抗體。編碼該多肽的核苷酸序列可用于DNA構建體或表達盒中，用于在目的生物中轉化和表達。所提供的組合物和方法可用于產生具有增強的害蟲抗性或耐受性的生物。還提供了包含編碼本發明的殺蟲蛋白的核苷酸序列的轉基因植物和種子。這些植物對昆蟲和其他害蟲具有抗性。提供了用于產生本文公開的多種多肽的方法，以及使用那些多肽來控制或殺滅害蟲的方法。還包括用于在樣品中檢測本發明多肽的方法和試劑盒。

本申請是分案申請，對應的母案申請的申請號為CN201680023339.0，申請日為2016年4月15日，發明名稱為“殺蟲基因和使用方法”。

技術領域

本發明涉及用于控制害蟲，特別是植物害蟲的方法和組合物。

相關申請的交叉引用

本申請要求美國臨時申請系列號62/151,156(提交于2015年4月22日)的權益，該申請的內容通過引用整體并入本文。

對經由EFS-WEB以文本文件提交的序列表的引用

經由EFS-Web以ASCII格式的序列表以電子方式提交序列表的正式副本，并使用名為AgB012.PCT_seq_listing.txt的文件，其創建于2016年4月13日，大小為1.5MB，與本說明書同時提交。包含在該ASCII格式文檔中的序列表是說明書的一部分，其全部內容通過引用并入本文。

背景技術

害蟲、植物病害和雜草是對作物的嚴重威脅。由于病蟲害造成的損失估計為全球農業生產的37％，其中13％是由昆蟲、細菌和其它生物導致的。

毒素是毒力決定因素，其在微生物致病性和/或逃避宿主免疫應答中發揮重要作用。來自革蘭氏陽性菌芽孢桿菌，特別是蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringensis)的毒素已被用作殺蟲蛋白。目前的策略是使用表達這些毒素的基因來生產轉基因作物。表達殺蟲蛋白毒素的轉基因作物用于對抗昆蟲造成的作物損害。

雖然使用芽孢桿菌毒素已經能成功地控制昆蟲，但是在世界許多已經密集使用了這些毒素的區域的某些目標害蟲中已經發展出對Bt毒素的抗性。解決這個問題的一個方法是將Bt作物和常規非Bt作物(庇護)交替排列播種。避免或減緩發展出昆蟲抗性的另一種方法是在轉基因植物中堆疊對昆蟲有不同作用模式的殺蟲基因。使用表達殺蟲蛋白毒素的轉基因作物的策略目前越來越強調新型毒素的發現，超出從蘇云金芽孢桿菌細菌中產生的毒素之外。這些毒素可能被證明是可有效替代那些衍生自蘇云金芽孢桿菌的那些毒素，用于開發昆蟲和害蟲抗性轉基因植物。因此，需要新型毒素蛋白。

發明內容

提供了具有殺蟲活性的組合物及其使用方法。組合物包括具有殺蟲活性的分離的和重組的多肽序列、編碼所述殺蟲多肽的重組的和合成的核酸分子、包含所述核酸分子的DNA構建體、包含所述核酸分子的載體、包含所述載體的宿主細胞，以及針對所述殺蟲多肽的抗體。編碼本文提供的多肽的多核苷酸序列可用于DNA構建體或表達盒中，用于在目的生物(包括微生物和植物)中轉化和表達。

本文提供的組合物和方法可用于生產具有增強的害蟲抗性或耐受性的生物。這些生物和包含這些生物的組合物理想地用于農業目的。還提供了包含編碼本發明的殺蟲蛋白的核苷酸序列的轉基因植物和種子。這些植物對昆蟲和其他害蟲具有抗性。

提供了用于產生本文公開的多種多肽的方法，以及使用那些多肽來控制或殺滅害蟲的方法。還包括用于檢測樣品中本發明多肽的方法和試劑盒。

附圖說明

圖1提供了SEQ ID NO：177、307、372、374和396的比對。差異的氨基酸以灰色突出顯示。