[發明專利]聚電解質膜、巨噬細胞外泌體及其在促進BMSCs分化中的應用

有效

• 申請號: 202210361219.9
• 申請日: 2022-04-07
• 公開（公告）號: CN114891728B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 趙名艷;龔帆;楚佳奇;涂陳麟
• 申請（專利權）人: 廣東醫科大學附屬醫院
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0786
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 文靜;郭煒綿

1.一種聚電解質膜在制備巨噬細胞外泌體中的應用，其特征在于：

所述的聚電解質膜是由糖胺多糖（GAGs）層和膠原（Col）層交替吸附形成，其總層數為8層；

所述的糖胺多糖為肝素（Hep）；

所述的膠原為I 型膠原（Col I）；

所述聚電解質膜的制備方法包括以下步驟：

（1）將糖胺多糖溶解于NaCl溶液中，配制得到糖胺多糖溶液；將膠原加入冰醋酸溶液A中，攪拌溶解并離心，取上清液，用含有NaCl的冰醋酸溶液B調節濃度，得到膠原溶液；調節糖胺多糖溶液和膠原溶液的pH值為3.9～4.2；

所述的冰醋酸溶液B中含有0.15 M NaCl；

（2）將基底在膠原溶液和糖胺多糖溶液中依次浸泡吸附，得到聚電解質膜，所述聚電解質膜的最外層是糖胺多糖層。

2.一種巨噬細胞外泌體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

取單核巨噬細胞，用完全培養基重懸，加入佛波酯培養2～3天，THP-1細胞分化為M0巨噬細胞，將M0巨噬細胞接種于涂覆權利要求1所述的聚電解質膜的培養器皿中，培養2～3天后，離心，收集含有巨噬細胞外泌體的培養液上清液；從培養液上清液中提取巨噬細胞外泌體。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：提取外泌體包括以下步驟：

上清液以300 g離心10 min，取上清液再以2000 g離心10 min，取上清液再以10000 g離心30 min，取上清液以100000 g離心70 min，棄上清，用適量的PBS將沉淀溶解；最后以100000 g離心70 min，棄上清，用適量的PBS將沉淀溶解，得到巨噬細胞外泌體。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：用完全培養基重懸后，THP-1細胞的密度為(0.5～3)×10⁶ 個/mL；所述M0巨噬細胞的接種密度為(0.5～4) ×10⁶ 個/mL。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：所述的完全培養基是添加10%胎牛血清和1%抗生素的RPMI 1640培養基。