[發明專利]一種細胞免疫調節蛋白及其應用

在審

• 申請號: 202210360130.0
• 申請日: 2022-04-06
• 公開（公告）號: CN114605521A
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 王鳳雪;溫永俊;趙洪哲;康斌;趙炳武;董鵬;張金龍;武玉梅
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學;金河佑本生物制品有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/66;C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C12N15/11;A61K38/17;A61P37/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京八月瓜知識產權代理有限公司 11543
• 代理人: 袁曉雨

本發明涉及基因工程技術領域，尤其是涉及一種細胞免疫調節蛋白及其應用，所述細胞免疫調節蛋白為pIL?18BP?X2，且所述pIL?18BP?X2的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。本發明從豬肺泡巨噬細胞(PAM)獲得的細胞免疫調節蛋白pIL?18BP?X2在大腸桿菌表達系統中可實現高效表達，并且經NI柱純化后可得到單一性蛋白；其是具有降低豬干擾素伽馬(pIFN?γ)分泌的小分子蛋白質，可顯著抑制pIFN?γ的mRNA表達量，調節pIFN?γ的活性的效果，具有治療應用潛力。因此，本發明的pIL?18BP?X2蛋白，豐富了細胞免疫調節劑，為臨床上調節細胞免疫提供了很好的幫助。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，尤其是涉及一種細胞免疫調節蛋白及其應用。

背景技術

細胞免疫是把雙刃劍，免疫太弱會使機體更容易感染病原微生物，而免疫太強會導致免疫細胞瘋狂地攻擊發炎部位周邊的細胞、組織、器官，引起免疫過激反應，造成對自身的損害，從而引發“細胞因子風暴”。

研究發現，IL-18mRNA在多種細胞(單核細胞、血管平滑肌細胞及內皮細胞等)中表達，并在含有這些細胞的器官及組織(肝、腎、骨骼肌等)中可檢測到IL-18mRNA的表達。IL-18具有多種有效的生物學功能，可通過誘導T細胞及自然殺傷細胞產生IFN-γ的作用，在抗感染、免疫調節、抗腫瘤及慢性炎性疾病的發生發展中扮演著重要角色。

目前，在發生結腸炎的患者中，干擾素-γ可以促進炎癥并加劇腸道內的炎癥反應，從而加重沙門氏菌引起的結腸炎，細胞免疫可以加重疾病的嚴重程度，此時應用本發明提供的蛋白可降低干擾素-γ的分泌，降低炎癥反應。研究表明，IL-18與重組IL-18bp結合可通過干預關鍵炎癥相關通路和殺傷細胞凋亡保護小鼠肝臟免受炎癥損傷。

根據人類疾病發展與IL-18BP的關系研究，具有調節免疫作用的IL-18BP在豬的疾病康復過程中也具有良好應用前景，目前國內外對豬IL-18BP的研究尚處于空白。

本發明提供的細胞免疫調節蛋白(pIL-18BP-X2)是通過基因工程方法從豬肺泡巨噬細胞(PAM)獲得，其具有降低豬干擾素伽馬(pIFN-γ)分泌的作用。該蛋白能高親和力與IL-18結合并抑制IL-18相關的生物學活性,從而降低其所參與的炎性反應，豐富了細胞免疫調節劑。并且，本發明提供的細胞免疫調節蛋白可在大腸桿菌大量表達制備便于純化。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型的細胞免疫調節蛋白，豐富了細胞免疫調節劑，為臨床上調節細胞免疫提供了幫助。

根據本發明實施例的第一方面，提供一種細胞免疫調節蛋白，所述細胞免疫調節蛋白為pIL-18BP-X2，且所述pIL-18BP-X2的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本發明的細胞免疫調節蛋白pIL-18BP-X2，全長190個氨基酸，理論分子量為21kDa，經證實，本發明的細胞免疫調節蛋白與已證明的細胞免疫調節蛋白同源性低，其為一種新型的可開發利用的免疫調節蛋白，豐富了細胞免疫調節劑。

根據本發明實施例的第二方面，提供一種細胞免疫調節劑，包括上述的細胞免疫調節蛋白，也理應屬于本發明的保護范圍。

根據本發明實施例的第三方面，提供一種上述細胞免疫調節蛋白的應用，所述細胞免疫調節蛋白在制備細胞免疫調節劑中的應用，也理應屬于本發明的保護范圍。

根據本發明實施例的第四方面，提供一種表達細胞免疫調節蛋白的基因，所述基因的堿基序列如SEQ IDNO.2所示。

本發明使用PCR方法克隆了表達細胞免疫調節蛋白的基因，該基因全長570bp，其DNA序列如SEQ IDNO.2所示。

根據本發明實施例的第五方面，提供一種制備上述基因的引物組合物，所述引物組合物包括pIL-18BP-X2-F(EcoRI)和pIL-18BP-X2-R(XhoI)；