[發明專利]基于eATRP信號放大策略的CEA電化學檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202210359045.2
• 申請日: 2022-04-06
• 公開（公告）號: CN114778839A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 楊懷霞;張亞萍;李道祥;侯夢圓;崔曉靜;劉艷菊
• 申請（專利權）人: 河南中醫藥大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N27/48;G01N27/30
• 代理公司: 鄭州中鼎萬策專利代理事務所(普通合伙) 41179
• 代理人: 徐文婷

1.基于eATRP信號放大策略的CEA電化學檢測試劑盒，其特征在于，包括以下原料：Apt1、Apt2、MCH、PEI、BMP、Me₆TREN、CuBr₂、KPF₆、FMMA、LiClO₄、EDC、NHS。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括：DMSO、H₂SO₄、無水乙醇、PBS緩沖液、超純水。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，

Apt1序列：5’-SH-(CH₂)₆-ATACCAGCTTATTCAATT-3’

Apt2序列：5’-AGGGGGTGAAGGGATACCC-3’。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，使用時，將部分原料配制為溶液，Apt1溶液濃度為1μM，Apt2溶液濃度為100μM，EDC溶液濃度為100μM，NHS溶液濃度為100μM，MCH溶液濃度為2mM，PEI溶液濃度為2mg/mL，BMP溶液濃度為2mM，KPF₆溶液濃度為0.1M，FMMA溶液濃度為10mM，CuBr₂/Me₆TREN溶液中CuBr₂和Me₆TREN的濃度均為10mM，LiClO₄溶液濃度為1.0M。

5.一種利用權利要求1-4任一項所述試劑盒檢測CEA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)電極修飾

①將Apt1溶液滴加到金電極上，反應，洗滌，吹干；

②將步驟①的電極浸泡在MCH溶液中，反應，洗滌，吹干；

③將待檢測樣品滴加至步驟②的電極表面，反應，洗滌，吹干；

④將Apt2-PEI溶液滴加到步驟③的電極上，反應，洗滌，吹干；

⑤將BMP溶液滴加到步驟④的電極表面，反應，洗滌，吹干；

⑥將步驟⑤的電極浸泡在eATRP反應溶液中，在恒定電位下，用i-t曲線電化學聚合，隨后用LSV方法處理電極，除去表面雜質；

(2)電化學測定

將修飾后的電極浸入LiClO₄溶液中，用SWV方法進行電化學檢測，根據電信號大小分析CEA含量。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，金電極先進行預處理，預處理方法為：用0.3μm和0.05μm氧化鋁粉分別對金電極表面進行拋光，然后，依次用超純水、無水乙醇和超純水超聲清洗電極，將清洗過的電極在新配制的水虎魚酸溶液中浸泡15min，并重復上述清洗步驟，清洗結束后取出，在0.5M H₂SO₄溶液中用循環伏安法處理電極，電位范圍設定為-0.3～1.5V，掃描速率為0.1V/s，重復掃描直至得到重合的CV圖，最后用超純水清洗電極，用氮氣吹干。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟①的反應溫度為37℃，時間為2h；步驟②的反應溫度為37℃，時間為0.5h；步驟③的反應溫度為37℃，時間為1h；步驟④的反應溫度為37℃，時間為1h；步驟⑤的反應溫度為37℃，時間為25min；步驟⑥的聚合溫度為室溫，時間為40min；步驟(2)的SWV的掃描范圍：0～0.8V，掃描速率：1.0V/s，電位增量：4mV。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，Apt2-PEI溶液的制備方法為：

將Apt2溶液、EDC溶液和NHS溶液等體積混合，然后加入到PBS緩沖液中，振蕩活化，得到已活化的Apt2溶液；然后加入等體積的PEI溶液混合，振蕩反應，得到Apt2-PEI溶液。