[發明專利]一種改造的嗜熱脂肪地芽孢桿菌

有效

• 申請號: 202210358767.6
• 申請日: 2022-04-07
• 公開（公告）號: CN114574400B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 呂濤;孫志文;劉龍飛
• 申請（專利權）人: 北京中檢葆泰生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/02;C12R1/01
• 代理公司: 北京蕙識同聯專利代理事務所(特殊普通合伙) 11966
• 代理人: 趙雪

本發明涉及一種改造的嗜熱脂肪地芽孢桿菌，具體而言，所述菌為嗜熱脂肪地芽孢桿菌(Geobacillus stearothermophilus)GS102,于2022年1月27日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.24380。本發明的菌株特異地對抗生素磺胺二甲嘧啶、恩諾沙星、替米考星和甲砜霉素具有高靈敏性。

技術領域

本發明涉及一種改造的嗜熱脂肪地芽孢桿菌，屬于生物技術領域。

背景技術

現代養殖業日漸向規?；?、集約化方向發展,抗生素已成為保障畜禽健康生長和畜牧業正常發展的物質基礎。如果不合理使用抗生素易造成食品中抗生素殘留,不僅危害人體健康,而且影響畜牧業的可持續健康發展。我國從1999年開始每年都會組織實施動物及動物產品抗生素殘留監控，從發布的抽檢通告可以看出，雖然產品的合格率逐漸升高，但仍有約0.5％的樣品中抗生素殘留超標，其中磺胺二甲嘧啶、恩諾沙星、替米考星和甲砜霉素的超標較為嚴重。加強抗生素殘留檢驗對畜牧業健康發展至關重要，亟待開發能夠同時檢測磺胺二甲嘧啶、恩諾沙星、替米考星和甲砜霉素的廣譜的檢測方法。

目前抗生素殘留檢測技術通常包括儀器法、酶聯免疫法和膠體金法，其中，儀器法的優點是能準確定性、精確定量，但使用此類儀器檢測成本高、檢測環境要求高、檢測周期長，不適用于現場檢測；酶聯免疫法成本低，但是操作復雜，批間差異大，準確性低，且往往每次只能測定某一種或某一類抗生素，樣品處理復雜、檢測成本高，無法實施現場檢測；膠體金法成本更高，雖然操作簡單，但每次只能測定一種或一類抗生素，且準確性較低。為了降低檢測成本且操作簡單更適于快速檢測，微生物法是最佳的選擇，其主要利用抗生素對微生物生長的抑制作用檢測樣品中的抗生素，原理是微生物的生長可產生代謝產物，使培養基中的顏色指示劑變色，而樣品中的抗生素能夠抑制微生物的生長，不產生代謝產物，從而使指示劑不變色，因此可通過培養基顏色的變化判斷樣品中是否含有抗生素。

常規的微生物方法通常靈敏度較低，如大多數抗生素的常規檢測限在200-1000μg/kg，而微生物法提高檢測靈敏度的關鍵在于菌株本身，如菌株對抗生素敏感，則采用相應菌株的微生物方法的靈敏度高，反之則低，因此，提高微生物法靈敏度的根本方法就是尋找到特異的敏感菌株，最好是對多種抗生素都比較敏感的菌株，這樣能同時快速檢測多種抗生素。

此前，發明人幸運地發現了一株對各類抗生素具有廣譜靈敏性的菌株，保藏號為CGMCC No.21738(CN 202110243389.2)。在此基礎上，發明人又進行了深挖改造實驗，利用生物突變技術設計了多個實驗方案，并通過在各種試材上測試，目前已篩選出了一株對磺胺二甲嘧啶、恩諾沙星、替米考星和甲砜霉素這四類抗生素均具有超過原菌株CGMCCNo.21738的高靈敏性的菌株。

發明內容

為了提高磺胺二甲嘧啶、恩諾沙星、替米考星和甲砜霉素四類抗生素的檢測靈敏度，本發明提供一種改造的嗜熱脂肪地芽孢桿菌，能夠快速檢測如食品、組織、飼料、血清和尿液等樣品中的抗生素。

本發明提供一種檢測樣品中抗生素殘留的方法，以所述的嗜熱脂肪地芽孢桿菌GS102作為對抗生素敏感的微生物，通過使培養基中的指示劑變色來檢測樣品中是否含有抗生素。

本發明的菌株來源于一株嗜熱脂肪地芽孢桿菌(Geobacillusstearothermophilus)，保藏編號為CGMCC No.21738，其為同時對多種抗生素普遍都十分敏感的菌株。