[發明專利]膀胱癌代謝組學標志物及其篩選方法

在審

• 申請號: 202210355837.2
• 申請日: 2022-04-06
• 公開（公告）號: CN114636770A
• 公開（公告）日: 2022-06-17
• 發明（設計）人: 李義;陳志超;王海峰
• 申請（專利權）人: 北京大學第三醫院（北京大學第三臨床醫學院）;北京中科健蘭集團有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N1/28;G01N1/38;G01N1/42;C08B37/08
• 代理公司: 合肥錦輝利標專利代理事務所(普通合伙) 34210
• 代理人: 王利利

1.膀胱癌代謝組學標志物，其特征在于：由尿液經改性脲酶處理得到；

所述的改性脲酶由如下步驟制成：

步驟A1：將乙酸溶液和殼聚糖混合，攪拌至殼聚糖完全溶解后，加入液態石蠟繼續攪拌，再加入司盤80，繼續攪拌后，滴加甲醛飽和水溶液，進行反應，制得預改性殼聚糖；

步驟A2：將預改性殼聚糖溶于乙酸溶液中，進行攪拌并加入氫氧化鈉溶液，調節反應液pH值，加入環氧氯丙烷，進行反應后，過濾去除濾液，將濾餅依次用去離子水、石油醚、乙醇洗滌至中性，再將濾餅加入鹽酸溶液中，保溫處理，制得交聯殼聚糖；

步驟A3：將交聯殼聚糖和二甲亞砜混合攪拌，加入氫氧化鈉和去離子水，繼續攪拌后，加入氯乙酸，升溫反應，后，過濾去除濾液，將濾餅用乙醇溶液洗滌，再將濾餅溶于去離子水中，加入鹽酸至產生白色絮狀沉淀，將沉淀物洗滌并烘干，制得交聯羧甲基殼聚糖；

步驟A4：將交聯羧甲基殼聚糖溶于去離子水中，加入氯化鎂，攪拌后，蒸餾去除去離子水，將底物加入磷酸緩沖液中，再加入脲酶水溶液，超聲處理，制得改性脲酶。

2.根據權利要求1所述的膀胱癌代謝組學標志物，其特征在于：步驟A1所述的乙酸溶液、殼聚糖、液態石蠟、司盤80、甲醛飽和水溶液得用量比為50mL:1g:200mL:0.2mL:2mL，乙酸溶液的質量分數為4％。

3.根據權利要求1所述的膀胱癌代謝組學標志物，其特征在于：步驟A2所述的預改性殼聚糖、乙酸溶液、環氧氯丙烷的用量比為1g:50mL:4mL。

4.根據權利要求1所述的膀胱癌代謝組學標志物，其特征在于：步驟A3所述的交聯殼聚糖、二甲亞砜、氫氧化鈉、去離子水、氯乙酸的用量比為5g:50mL:22.5g:25mL:25mL。

5.根據權利要求1所述的膀胱癌代謝組學標志物，其特征在于：步驟A4所述的交聯羧甲基殼聚糖、氯化鎂、磷酸緩沖液、脲酶水溶液的用量比為1g:1.5g:10mL:10mL，脲酶水溶液的濃度為0.15mg/mL。

6.根據權利要求1所述的膀胱癌代謝組學標志物的篩選方法，其特征在于：具體包括如下步驟：

步驟S1：取尿液，加入改性脲酶，震蕩混勻10-15s后，在溫度為37℃的條件下，進行酶解15-20min，加入甲醇，震蕩混勻30-35s后，在轉速為14000-14500r/min，溫度為3-5℃的條件下，離心15-20min，將上清液凍干；

步驟S2：向凍干樣本中加入甲氧胺溶液，震蕩混勻1-1.5min，再在室溫條件超聲處理15-20min，再在溫度為37℃的條件下，保溫1.5-2h，加入N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺，震蕩混勻10-15s后，繼續保溫1-1.5h后，在轉速為14000-14500r/min，溫度為3-5℃的條件下，離心10-15min，將上清液進行氣相色譜-質譜處理，得到膀胱癌代謝組學標志物。