[發明專利]一種檢測精子密度的方法和裝置

在審

• 申請號: 202210353516.9
• 申請日: 2022-04-06
• 公開（公告）號: CN114594017A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 張玲;孫贇;何亞瓊
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院
• 主分類號: G01N9/24
• 分類號: G01N9/24
• 代理公司: 上海驍象知識產權代理有限公司 31315
• 代理人: 趙峰

本發明提供了一種檢測精子密度的方法，屬于即時檢測領域，包括收集精子樣本；將精子樣本與活細胞染料充分混合；在紫外光的照射下，查看精子發出的熒光強度，通過與質控樣本的光的強度對比來判斷精子的密度情況。還提供了一種檢測精子密度的裝置，為密閉不透光殼體，內部設置一個紫外發射裝置、透明的質控容器和透明的檢測容器；殼體外壁上設置有質控顯示孔和檢測顯示孔，質控容器中置有赫斯特熒光染料和對照品，檢測容器中置有赫斯特熒光染料，用抽吸方式將精液加入檢測容器中，與赫斯特熒光染料混勻，僅需1分鐘時間，即可在紫外光照射下發出熒光信號，通過與質控樣本的光的強度對比來判斷精子的密度情況。

技術領域：

本發明屬于即時檢測技術領域，具體來說是一種檢測精子密度的方法和裝置。

背景技術：

不孕不育的發病率已高達10-15%，其中一半因素是男性因素。男性不育的發生原因很大程度上是由于精子數量少導致所致。當精子密度低于15~20百萬/ml就可能會出現生育困難的情況。由于生活壓力、喝酒、熬夜、不健康飲食和環境污染等都可以降低精子密度，導致生育力降低。對于有生育需求的男性而言，監測精子密度對于提高受孕率、保證后代健康是非常有必要的。

現有的即用式精子數量檢測方法存在多種改進空間。現有的檢測試紙主要原理是對精子中的SP10蛋白進行分析，通過對SP10蛋白進行定性或者與對照樣本進行比色用以測定精子的濃度，比如大衛“人精子SP10蛋白檢測試紙（膠體金法）”、金秀兒“精子SP10蛋白檢測試劑（膠體金法）”。基于該原理的檢測試紙存在操作上，需要用到多個部件才能完成對精子的處理和濃度的分析，操作比較繁瑣；同時，基于SP10的檢測方法要求精液排除體外后，等待1個小時時間直到精液液化，耗時較久；液化的精液需要立即進行檢測，不能放置較長時間從而影響SP10蛋白含量，導致結果失真，所以對樣本的要求較高。另外，樣本采集需要人工刺激進行采集，不得使用任何潤滑劑和洗液或者避孕套進行精液采集，因為以上潤滑劑可能會影響蛋白性能從而影響檢測結果。

基于現有精子密度檢測試劑盒的缺陷，本發明采用不同的檢測原理，達到更方便、更快速和更準確的目的。

每個精子都包含一個細胞核，細胞核里面主要的成分是脫氧核糖核酸（DNA），可以被活細胞染料比如赫斯特熒光染料特異性地標記，在紫外光照射下，細胞核發出藍色熒光，屬于可見光范圍。精液中細胞核的數量和精液的熒光強度呈正相關關系。因此，可以通過單位體積的精液發光強度來對精子濃度進行定量。Hoechst染料是一種活細胞染料，可以透過活細胞的細胞膜和細胞核膜，特異性地與DNA結合，在多種人類細胞系中得到證實。赫斯特熒光染料常用的是Hoechst 33258(甲嗪雙苯咪酚三鹽酸鹽)和Hoechst 33342（雙苯并咪唑），與DNA結合后，可以被紫外光激發并發出藍色熒光。Hoechst 33258最大激發波峰值約355納米；最大發射波長465納米。Hoechst 33346最大激發波峰值約346納米；最大發射波長460納米。由于細胞核中DNA雙螺旋的數量相比細胞蛋白更穩定，不會因為潤滑劑等原因導致DNA雙螺旋快速降解等現象；同時，赫斯特熒光染料也非常穩定，可以快速地與細胞內DNA雙螺旋穩定結合；紫外激發下赫斯特熒光強度比較穩定，不容易淬滅。因此，基于精子細胞核數量的精子密度檢測可以更準確、更穩定。

發明內容：

針對現有技術中的便攜式精子數量檢測試劑盒的缺陷，本發明提供了一種檢測精子密度的方法，所述的這種檢測精子密度的方法要解決現有技術中的精子密度檢測方法復雜、時間長的技術問題。

本發明提供了一種檢測精子密度的方法，包括如下步驟：

1)收集精子樣本；

2)精子樣本與細胞染料充分混合；

3)在紫外光的照射下，查看精子發出的光的強度，通過光的強度與質控樣本進行對比來判斷精子的密度情況。

進一步的，所述的熒光染料為赫斯特熒光染料33258溶液（Hoechst 33342）或者赫斯特熒光染料33258溶液（Hoechst 33258），終濃度為0.3~1.0mg/ml。