[發明專利]免提取核酸檢測人乳頭瘤病毒的引物探針組、檢測試劑及其應用

在審

• 申請號: 202210352684.6
• 申請日: 2022-03-31
• 公開（公告）號: CN114891923A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 劉松林;趙丹蕊;郭興中;陳文;秦澤倩;倪佳潤
• 申請（專利權）人: 杭州丹威生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6806;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 杭州君銳知產專利代理事務所(普通合伙) 33443
• 代理人: 方琦

1.一種免提取核酸檢測人乳頭瘤病毒的引物探針組，其特征在于：所述免提取核酸檢測人乳頭瘤病毒的引物探針組包括

用于擴增14 種HPV高危亞型人乳頭瘤病毒的HPV通用型引物，如SEQ ID No .1~7所示的核苷酸序列；14 種HPV高危亞型人乳頭瘤病毒是HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68；

分別特異性檢測13種HPV高危亞型人乳頭瘤病毒HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66的HPV特異性探針，如SEQ ID No .8~20所示的核苷酸序列，分別特異性檢測HPV68a、HPV68b的HPV特異性探針，如SEQ ID No .21~22所示的核苷酸序列，

擴增并檢測內標基因的特異性引物對和探針，如SEQ ID No .23~25所示的核苷酸序列。

2.一種免提取核酸檢測人乳頭瘤病毒的檢測試劑，其特征在于：所述的檢測試劑包括用于對采集的樣本進行保存的樣本保存液和用于對樣本實時熒光PCR檢測的熒光PCR試劑，

樣本保存液包含：終濃度1-15 μg/mL的Carrier RNA和終濃度5-30 mM的TCEP；

所述熒光PCR試劑包含：權利要求1所述的引物探針組，終濃度1-15 μg/mL的CarrierRNA（核苷酸類似物），和終濃度0.1-0.15 M的 tris（三羥甲基氨基甲烷）。

3.根據權利要求2所述的檢測試劑，其特征在于：所述熒光PCR試劑還包含：終濃度0.01%-0.1%（wt）的吐溫-20，和終濃度0.1-5 mM的TCEP。

4.一種含有權利要求2所述的檢測試劑的免提取核酸檢測人乳頭瘤病毒的檢測試劑盒。

5.一種非診斷或治療目的人乳頭瘤病毒免提取核酸檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟：

S1、樣本保存液的制備：樣本保存液包含：終濃度1-15 μg/mL的Carrier RNA和終濃度5-30 mM的TCEP；

S2、采樣及保存：利用一次性宮頸采樣刷采集HPV樣本至包含樣本保存液的樣本保存管中；

S3、細胞富集，吸取樣本轉移至樣本保存管中，靜置5-15min；

S4、配制熒光PCR試劑，所述熒光PCR試劑包含：權利要求1所述的引物探針組，終濃度1-15 μg/mL的Carrier RNA，和終濃度0.1-0.15 M的 tris；

S5、實時熒光PCR檢測，從樣本保存管中吸取樣本，加入熒光PCR試劑中，混勻封蓋后放入PCR儀中，設置反應程序，進行熒光PCR檢測。

6.根據權利要求5所述的人乳頭瘤病毒免提取核酸檢測方法，其特征在于：所述熒光PCR試劑還包含：終濃度0.01%-0.1%（wt）的吐溫-20，和終濃度0.1-5 mM的TCEP。

7.根據權利要求5所述的人乳頭瘤病毒免提取核酸檢測方法，其特征在于：步驟S3所述樣本保存管具有 “V”型底部，V”型底部夾角≤30°。