[發明專利]一種適用于芳香藥用植物牛至多倍體誘導和培育的方法

有效

• 申請號: 202210352032.2
• 申請日: 2022-04-02
• 公開（公告）號: CN114793894B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 石雷;王頔;李慧;夏菲;白紅彤;閆一皓
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H1/08
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

1.一種牛至四倍體植株誘導和培育的方法，其特征在于，將牛至無菌苗莖段上萌動的腋芽在離體培養基上進行秋水仙素誘導，經過秋水仙素誘導的芽生長至至少具有3對葉片時，剪取葉片，用流式細胞儀進行檢測，確定倍性，再通過配套的離體快繁技術擴增，獲得四倍體牛至植株，

其中，所述的無菌苗的獲得方式為：選取健康、無病蟲害的牛至嫩梢作為外植體，表面滅菌后，接種于1/2MS + 0.1~0.5 mg/L 6-BA + 3%蔗糖的啟動培養基中，待外植體恢復生長后接種于MS + 0.5~1.0 mg/L 6-BA + 3%蔗糖的擴增培養基中，獲得大量長勢一致的無菌苗；

所述的秋水仙素的誘導方法為：配制誘導培養基MS + 0.5~1.0 mg/L 6-BA + 0.05~0.2 mg/L IBA + 3%蔗糖，趁滅菌后的誘導培養基未冷卻固化前，量取誘導培養基灌裝于無菌容器內，待誘導培養基充分冷卻固化后，將所述的無菌苗剪成只有一個節的莖段，接種至所述誘導培養基中，使莖段葉腋處低于誘導培養基上表面，觀察莖段腋芽的萌動情況，3~6天后，吸取0.1%秋水仙素無菌溶液，分次均勻滴加至上述容器內，置于黑暗環境中培養，所述誘導培養基與所述秋水仙素無菌溶液的體積比為10:0.1~1；24~72小時后將莖段從誘導培養基中取出，用無菌水清洗2~4次，接種至MS + 0.05~0.2 mg/L 6-BA + 0.05~0.1 mg/LNAA + 2%蔗糖的恢復培養基中；

所述的配套的離體快繁技術包括：將鑒定為四倍體的誘導芽剪成具有一個節的莖段，接種于1/6~2/3MS + 1/3~2/3N6 + 0.5~2.0 mg/L 6-BA + 0.1~0.3 mg/L IBA + 3%蔗糖的增殖培養基中，20~25天后將莖段上分化出的不定芽分段剪下接種于MS + 0.1~0.3 mg/L6-BA + 0.05~0.2 mg/L NAA + 3%蔗糖的壯苗培養基中，培養7~10天獲得生長一致的牛至四倍體無菌苗，將獲得的牛至四倍體無菌苗接種于1/2MS + 0.1~0.5 mg/L NAA + 2%蔗糖的生根培養基中進行生根培養，生根培養10~15天后，將牛至四倍體生根苗連同培養容器轉移至溫室，打開容器蓋煉苗5~7天，栽種于常規培養基質中，正常管理。

2. 如權利要求1所述的牛至四倍體植株誘導和培育的方法，其特征在于，外植體表面滅菌方法為：用洗潔精水浸泡10~20 min后自來水沖洗5~8次至無洗潔精殘留，轉移至超凈工作臺內，加入75%酒精表面消毒10~30 s，無菌水沖洗2次，用0.1~0.2%升汞消毒4~8 min，無菌水沖洗6~8次。

3.如權利要求1所述的牛至四倍體植株誘導和培育的方法，其特征在于，0.1%秋水仙素無菌溶液的制備方法為：將秋水仙素用二甲基亞砜助溶后配制成0.1%的溶液，高壓滅菌。