[發(fā)明專利]一種鑒定黑森癭蚊的引物對及其鑒定方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210349816.X
• 申請日: 2022-04-02
• 公開（公告）號: CN114807383A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張皓;馬琦;胡想順;黃衛(wèi)利;陳雨馨
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué);西安黃氏生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 西安匯恩知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61244
• 代理人: 畢波

本發(fā)明提供了一種鑒定黑森癭蚊的引物對，引物對包括上游引物HFSP?1和下游引物HFSP?2；上游引物HFSP?1的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，上游引物HFSP?2的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。還提供了鑒定方法，用上游引物HFSP?1和下游引物HFSP?2對待測樣本的DNA進行PCR擴增，若出現(xiàn)170bp的DNA條帶，則待測樣本為黑森癭蚊。本發(fā)明為黑森癭蚊的鑒定提供簡便穩(wěn)定的分子標(biāo)記，解決黑森癭蚊快速、準(zhǔn)確鑒定的技術(shù)難題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于黑森癭蚊鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒定黑森癭蚊的引物對及其鑒定方法。

背景技術(shù)

黑森癭蚊(Mayetiola destructor(Say))屬雙翅目(Diptera)、癭蚊科(Cecidomyiidae)、癭蚊亞科(Cecidomyiinae)、喙癭蚊屬(Mayetiola)，是世界性小麥重要害蟲，也是我國進境植物檢疫害蟲。

黑森癭蚊在各地一年可發(fā)生1-6代不等，具有兼性滯育習(xí)性。以三齡幼蟲在圍蛹內(nèi)潛藏于冬小麥植株或小麥殘留麥茬上越冬。翌年春天，越冬幼蟲發(fā)育化蛹。成蟲不取食，壽命約3d。卵多產(chǎn)于寄主葉片正面脈溝中，經(jīng)3-10d孵化。初孵幼蟲沿脈溝爬入葉鞘取食。單頭幼蟲取食即可造成小麥植株生長受阻，甚至死亡而造成經(jīng)濟損失。除小麥外，還可取食為害大麥、黑麥、冰草屬植物、葡萄龍牙草以及其他多種禾本科牧草和雜草。黑森癭蚊在國內(nèi)適生區(qū)廣泛，我國65％的麥區(qū)均適于其定殖發(fā)生，一旦在國內(nèi)擴散蔓延，將對我國小麥安全生產(chǎn)構(gòu)成嚴重威脅。因此，加強進境檢疫與國內(nèi)疫情防控對于預(yù)防其擴散蔓延意義重大。

目前，黑森癭蚊的鑒定識別依賴成蟲的形態(tài)鑒定，成蟲主要鑒別特征如下：體形似小蚊，灰黑色。體長3-4mm，雌蟲大于雄蟲。頭、復(fù)眼和胸部背面黑色，胸側(cè)和腹部黃褐色或紅褐色。下顎須4節(jié)，第一節(jié)短，第二節(jié)較粗，第三節(jié)較長，第四節(jié)長于第三節(jié)的1/3。觸角黃色或黃褐色， 16-18節(jié)，雄蟲多為17節(jié)，雌蟲多為16節(jié)。觸角基節(jié)鐵鉆形，梗節(jié)球形，鞭節(jié)圓錐形，有環(huán)絲，具有直立短毛。雄蟲觸角鞭節(jié)有近透明的細長柄。胸部背面有2條明顯的縱紋；小盾片黑色，具有黑毛。翅較寬，翅面密布短毛，后緣毛較長。翅脈簡單，前緣脈(C)淡褐色，基部粉紅色；第一縱脈(R₁)很短，幾乎與前緣脈合并，與翅前緣中部相接；第二縱脈(Rs) 較發(fā)達且直，至近翅尖時稍向下彎，在翅尖之前與后緣相接；Cu脈分叉處和Cu2脈與后緣的相接處，以及R1脈的末端幾乎在一條直線上。平衡棒發(fā)達，淡紅色，覆不均勻的黑色鱗片。足細長，跗節(jié)5節(jié)，第Ⅰ節(jié)最短，第Ⅱ節(jié)最長，第Ⅴ節(jié)近末端具一對爪，彎曲細長，兩爪間有一爪間突，有爪墊一個，長于爪，雌、雄爪均單一無齒。腹部各節(jié)背板兩側(cè)各具有一大方形黑斑點。雌蟲產(chǎn)卵管由3節(jié)組成，圓柱形，淡粉紅色，末節(jié)端部為褐色。雄蟲腹部末節(jié)淡粉紅色，具一對褐色抱握器，生殖器位于其中，上生殖板較寬，上面有許多感覺孔，缺刻深凹入，多數(shù)呈“V”形，少數(shù)略呈“U”形。下生殖板較窄，兩側(cè)端部一般可見4-5個乳頭狀突起。尾鋏二節(jié)，第一節(jié)粗壯，第二節(jié)細長，長近于寬的4倍，末端生爪。

形態(tài)鑒定方法對標(biāo)本的完整性和鑒定者的專業(yè)水平均要求較高，且在進境傳播中截獲的主要蟲態(tài)為幼蟲和蛹，采用形態(tài)鑒定方法遠遠不能滿足口岸檢疫快速、準(zhǔn)確的要求；在國內(nèi)疫情監(jiān)測中，采用性誘捕技術(shù)時，會誘捕到非靶標(biāo)種類，且捕獲的蟲體往往破損，不利于形態(tài)識別。因此，無論是口岸檢疫工作還是生產(chǎn)一線疫情監(jiān)測，均亟需一種快速、準(zhǔn)確、可靠的黑森癭蚊種類鑒定技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述生產(chǎn)需求與技術(shù)問題，提供一種鑒定黑森癭蚊的引物對及其鑒定方法，該黑森癭蚊的引物為黑森癭蚊的鑒定提供簡便穩(wěn)定的分子標(biāo)記，解決區(qū)分黑森癭蚊的難題，為今后黑森癭蚊的檢疫檢驗、疫情監(jiān)測與防控奠定了基礎(chǔ)。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種鑒定黑森癭蚊的引物對，所述引物對包括上游引物HFSP-1和下游引物HFSP-2；所述上游引物HFSP-1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述上游引物HFSP-2 的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。