[發明專利]一種提高染色效率的蘇木素染液及其制備方法

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• 申請號: 202210348993.6
• 申請日: 2022-04-01
• 公開（公告）號: CN114608923A
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 蔡燕;鄧杰;梁建
• 申請（專利權）人: 深圳市心陽醫療健康產業有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 深圳市知高達專利代理有限公司 44869
• 代理人: 李喆

本發明公開了一種提高染色效率的蘇木素染液及其制備方法，蘇木素染液的成分包括蘇木素、無水乙醇、硫酸鋁、蒸餾水、氧化劑、丙三醇、PH調節劑、乙二醇、乙二胺四乙酸二鈉、磷鎢酸；其制備方法包括以下步驟：S1、按計量稱取各原料；S2、在燒杯中依次加入無水乙醇、乙二醇、蘇木素，得到蘇木素溶液；S3、在容器中依次加入蒸餾水、硫酸鋁，緩慢攪拌直至硫酸鋁完全溶解，然后加入乙二胺四乙酸二鈉，得到硫酸鋁溶液；S4、將硫酸鋁溶液加入到蘇木素溶液中，依次加入氧化劑、丙三醇、磷鎢酸，得到混合溶液，在混合溶液中加入PH調節劑；S5、靜置后進行過濾即得到蘇木素染液。

技術領域

本發明涉及生化領域，尤其涉及一種提高染色效率的蘇木素染液及其制備方法。

背景技術

蘇木精—伊紅染色法(hematoxylin-eosinstaining)，簡稱HE染色法，其為石蠟切片技術里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。

蘇木精—伊紅染色法中的操作步驟主要包括切片—烤片—脫蠟—水化—蘇木素染色—分化—返藍—伊紅染色—脫水—透明—封片；其中，蘇木素染色操作中主要用到蘇木素染色液，目前常見有以下問題：

1)蘇木素染色液表面產生容易金屬膜，或者有染料沉淀，容易導致蘇木素染色后片子表面存在污跡，難以除去，導致出現染色不均、無法讀片的現象。

2)對于蘇木素染色液產生的金屬膜，需要過濾除去，增加了技術人員的工作量，同時浪費時間和試劑。

3)容易出現核質共染現象，染色效果不佳。

4)染色穩定性差，容易褪色，不能滿足保存30年的使用需求。

5)500ml的蘇木素染液一般染不到2000張片子，利用率較差。

6)在不同的季節、溫度對染色時間有不同的要求，需要先探索合適的染色時間才能開始臨床應用，增加了工作量，降低了效率。

發明內容

本發明目的是針對上述問題，提供一種提高細胞核染色效果的蘇木素染液及其制備方法。

為了實現上述目的，本發明的技術方案是：

一種提高染色效率的蘇木素染液，所述蘇木素染液的成分包括蘇木素、無水乙醇、硫酸鋁、蒸餾水、氧化劑、丙三醇、PH調節劑、乙二醇、乙二胺四乙酸二鈉、磷鎢酸；各成分的質量百分比為：蘇木素0.2％、無水乙醇15～20％、硫酸鋁1％、蒸餾水65～70％、氧化劑0.01～0.02％、丙三醇5％、PH調節劑0.2％、乙二醇7.7～7.9％、乙二胺四乙酸二鈉2.5～3.5％、磷鎢酸0.5～1.2％。

進一步的，所述蘇木素染液中各成分的質量百分比為：蘇木素0.2％、無水乙醇16.79％、硫酸鋁1％、蒸餾水65％、氧化劑0.01％、丙三醇5％、PH調節劑0.2％、乙二醇7.8％、乙二胺四乙酸二鈉3％、磷鎢酸1％。

進一步的，所述氧化劑為碘酸鉀、碘酸鈉中的一種或兩種混合。

進一步的，所述PH調節劑為檸檬酸、冰醋酸、酒石酸中的一種或多種混合。

一種蘇木素染液的制備方法，包括以下步驟：

S1、按計量稱取蘇木素、無水乙醇、硫酸鋁、蒸餾水、氧化劑、丙三醇、PH調節劑、乙二醇、乙二胺四乙酸二鈉、磷鎢酸；

S2、在燒杯中依次加入無水乙醇、乙二醇、蘇木素，以200～300r/min的轉速進行攪拌，直至蘇木素完全溶解，得到蘇木素溶液；

S3、在容器中依次加入蒸餾水、硫酸鋁，緩慢攪拌直至硫酸鋁完全溶解，然后加入乙二胺四乙酸二鈉，攪拌均勻后得到硫酸鋁溶液；