[發(fā)明專利]一種利用黃曲霉菌核保藏黃曲霉菌種的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210348298.X
• 申請(qǐng)日: 2022-04-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114591842A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐萍;馬思宇;熊光文;張思琪;張紫夢(mèng);寸海春;何鵬搏;何月秋;吳國(guó)星;秦小萍;王再?gòu)?qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/04
• 分類號(hào): C12N1/04;C12N1/14;C12R1/67
• 代理公司: 昆明合盛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53210
• 代理人: 吳瑕

本發(fā)明公開(kāi)了一種利用黃曲霉菌核保藏黃曲霉菌種的方法，主要包括：S1：刺激黃曲霉菌核產(chǎn)生；S2：黃曲霉菌核收集、洗滌、烘干；S3：黃曲霉菌核保藏；由于黃曲霉菌核具有較強(qiáng)的抗逆性，遺傳背景穩(wěn)定，適宜長(zhǎng)時(shí)間保存而不易變異；通過(guò)對(duì)黃曲霉的菌核進(jìn)行保藏，有效的解決了菌株易變異，保存和接種過(guò)程易造成環(huán)境污染的難題，使黃曲霉的保藏方法簡(jiǎn)便有效，菌株遺傳穩(wěn)定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于黃曲霉保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用黃曲霉菌核保藏黃曲霉菌種的方法。

背景技術(shù)

黃曲霉，半知菌類，是一種常見(jiàn)的腐生真菌；多見(jiàn)于發(fā)霉的糧食、糧制品及其它霉腐的有機(jī)物上；黃曲霉菌落生長(zhǎng)繁殖快，結(jié)構(gòu)疏松，表面灰綠色，背面無(wú)色或略呈褐色；黃曲霉的保存方法主要有：1)沙土保存法：即將沙和土以3:2比例混合，經(jīng)稀酸處理洗凈過(guò)篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm；滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的孢子，用無(wú)菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經(jīng)真空抽干，外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存，保存期可達(dá)5～7年；2)冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑(一般用脫脂牛奶或血清)相混合，放在安瓿管內(nèi)于-20～-30℃的乙醇浴中速凍；然后，在低溫下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽結(jié)凍，熔封安瓿管，于低溫下保存；保存期可達(dá)5～10年之久；3)石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上；4)濾紙片保藏法；

由于黃曲霉產(chǎn)孢量大，保存過(guò)程中和保存后的接種很容易導(dǎo)致黃曲霉孢子擴(kuò)散而污染環(huán)境；黃曲霉產(chǎn)生的菌核具有較強(qiáng)的抗逆性，遺傳穩(wěn)定，適宜長(zhǎng)時(shí)間保存而不易變異。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種利用黃曲霉菌核保藏黃曲霉菌種的方法，通過(guò)刺激黃曲霉產(chǎn)生菌核，對(duì)菌核進(jìn)行處理后，單獨(dú)對(duì)黃曲霉的菌核進(jìn)行保藏，后期對(duì)菌核進(jìn)行培養(yǎng)繁殖產(chǎn)生黃曲霉；

為了達(dá)到上述技術(shù)目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種利用黃曲霉菌核保藏黃曲霉菌種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：刺激黃曲霉菌核產(chǎn)生：將分離出的黃霉菌接種PSA培養(yǎng)基上在30～32℃環(huán)境下培養(yǎng)12～15d，誘導(dǎo)刺激黃曲霉產(chǎn)生菌核；

S2：收集S1中產(chǎn)生的黃曲霉菌核，用無(wú)菌水洗滌菌核，至表面無(wú)大量孢子附著；用濾紙吸干菌核表面水分，轉(zhuǎn)入36℃-38℃恒溫烘箱中烘干36-40小時(shí)；

S3：將S2中經(jīng)過(guò)洗滌和烘干的黃曲霉菌核放入保存介質(zhì)中封存，超低溫條件下保藏；

優(yōu)選的，所述保存介質(zhì)為牛皮紙或甘油；

優(yōu)選的，所述超低溫為零下80℃。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明通過(guò)誘導(dǎo)刺激黃曲霉產(chǎn)生菌核，對(duì)菌核進(jìn)行洗滌、烘干處理后放入甘油或用牛皮紙密封，置于超低溫環(huán)境下保藏；有效的解決了菌株易變異，保存和接種過(guò)程易造成環(huán)境污染的難題，使黃曲霉的保藏方法簡(jiǎn)便有效，菌株遺傳穩(wěn)定。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明的黃曲霉在PSA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)和產(chǎn)生的菌核；

圖2是本發(fā)明的黃曲霉菌核的顯微視圖；

圖3是本發(fā)明的黃曲霉菌核保藏于甘油中放置于-80℃超低溫冰箱內(nèi)保藏；

圖4是本發(fā)明黃曲霉菌核接代培養(yǎng)。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1