[發(fā)明專利]耐熱性多聚體蛋白支架、耐熱性多聚體蛋白支架在疫苗中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210345996.4
• 申請日: 2022-04-02
• 公開（公告）號: CN115920026A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳澤良;張勁松
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/385;C07K19/00
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 劉思言

本申請屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及耐熱性多聚體蛋白支架、耐熱性多聚體蛋白支架在疫苗中的應(yīng)用。本申請?zhí)峁┝四蜔嵝远嗑垠w蛋白支架，包括：用于偶聯(lián)的第一標(biāo)簽和耐熱性多聚體蛋白；所述第一標(biāo)簽連接在所述耐熱性多聚體蛋白的N端；所述耐熱性多聚體蛋白具有SeqIDNO.1～SeqIDNO.4所示序列中的一種或多種。本申請?zhí)峁┝四蜔嵝远嗑垠w蛋白支架、耐熱性多聚體蛋白支架在疫苗中的應(yīng)用，通過免疫原性較高的新型耐熱性多聚體蛋白，用于制備各種疫苗抗原的耐熱性多聚體蛋白支架和佐劑，從而建立一種基于耐熱性多聚體蛋白制備疫苗熱穩(wěn)定性支架并增強(qiáng)抗原免疫原性的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及耐熱性多聚體蛋白支架、耐熱性多聚體蛋白支架在疫苗中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

傳統(tǒng)疫苗主要基于減毒或滅活的活病原體。盡管其通常在宿主體內(nèi)誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng)方面非常有效，但該類型疫苗通常存在安全問題。例如，減毒活疫苗可能通過恢復(fù)為野生型而重新獲得致病性，尤其是在免疫缺陷人群中。此外，此類疫苗通常需要嚴(yán)格的儲存條件以保持其免疫活性，意外暴露于環(huán)境壓力(例如，光照或溫度)可能會導(dǎo)致免疫原性喪失。批次間變異性也可能是此類疫苗的一個(gè)問題，尤其是在大規(guī)模生產(chǎn)培養(yǎng)病原體期間。改良的亞單位疫苗與減毒活疫苗或滅活疫苗相比，具有更高的安全性和更小的批次間差異，但一直存在低免疫原性的缺陷，需要以高劑量和佐劑給藥。

為了解決傳統(tǒng)疫苗的問題，一種策略是通過將抗原與多聚體蛋白支架組合以賦予抗原高的穩(wěn)定性或免疫原性。其工作原理主要是多聚體蛋白支架具有明確定義的平行多聚體結(jié)構(gòu)，具有高穩(wěn)定性，允許引入目標(biāo)結(jié)合抗原和鉸鏈區(qū)，并在不破壞目標(biāo)抗原結(jié)合的情況下通過自組裝實(shí)現(xiàn)所需的多價(jià)性。多聚體蛋白支架可在表面呈現(xiàn)多個(gè)副本的抗原或抗原表位，產(chǎn)生高局部密度的結(jié)構(gòu)有序表位，并能夠與B細(xì)胞受體進(jìn)行高親和力相互作用，誘發(fā)B細(xì)胞受體信號傳導(dǎo)和強(qiáng)免疫刺激(例如T輔助細(xì)胞獨(dú)立的B細(xì)胞活化)；其次，由于多聚體蛋白支架的顆粒性質(zhì)和相對較大的尺寸，其可被專職抗原遞呈細(xì)胞(例如樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)有效攝取和處理，進(jìn)而促進(jìn)強(qiáng)烈的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。

但是，現(xiàn)有多聚體蛋白抗原支架種類少，存在候選抗原遠(yuǎn)多于抗原支架的問題，導(dǎo)致機(jī)體先對抗原支架的免疫反應(yīng)會抑制對抗原-支架組合的免疫反應(yīng)，急需開發(fā)新型疫苗抗原支架。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本申請?zhí)峁┝四蜔嵝远嗑垠w蛋白支架、耐熱性多聚體蛋白支架在疫苗中的應(yīng)用，將新型耐熱性多聚體蛋白作為各種疫苗抗原的耐熱性多聚體蛋白支架和佐劑，建立一種基于耐熱性多聚體蛋白制備疫苗熱穩(wěn)定性支架并增強(qiáng)抗原免疫原性的方法。

本申請第一方面提供了耐熱性多聚體蛋白支架，包括：

用于偶聯(lián)的第一標(biāo)簽和耐熱性多聚體蛋白；

所述第一標(biāo)簽連接在所述耐熱性多聚體蛋白的末端；

所述耐熱性多聚體蛋白具有Seq?ID?NO.1、Seq?ID?NO.2、Seq?ID?NO.3和Seq?IDNO.4所示序列中的一種或多種。

具體的，所述第一標(biāo)簽連接在所述耐熱性多聚體蛋白的N端或C端，優(yōu)選為N端；保證多聚體蛋白的N端或C端暴露在顆粒蛋白表面。

另一實(shí)施例中，所述第一標(biāo)簽選自SpyCatcher、SnoopCatcher、SdCatcher和DogCatcher中的一種或多種。

另一實(shí)施例中，所述標(biāo)簽通過連接肽連接在所述耐熱性多聚體蛋白的末端，可以為N端或C端；所述連接肽的序列為(GGGGS)_n(1≤n≤4)或(GGGGA)_n(1≤n≤4)。

具體的，所述連接肽為柔性連接肽，柔性連接肽是一類以甘氨酸Gly為主要成分的柔軟易彎折的連接肽，可根據(jù)連接蛋白的不同，長度適當(dāng)進(jìn)行調(diào)整，本申請所述連接肽選擇GGGGSGGGGSGGGGS效果最佳。