[發(fā)明專利]外泌體微球混懸液及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210343697.7
• 申請日: 2022-04-02
• 公開（公告）號: CN114921406A
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 段春光;李征宇
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)總醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N11/10
• 代理公司: 深圳中一聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44414
• 代理人: 方良

本申請涉及生物提取工藝技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種外泌體微球混懸液及其制備方法。該外泌體微球混懸液的制備方法包括如下步驟：獲取外泌體；配制多糖混懸液；將外泌體和多糖混懸液進行混合處理得到混合溶液，將混合溶液進行噴霧處理得到顆粒微球；將顆粒微球分散在膠原基質(zhì)溶液中得到外泌體微球混懸液。該制備方法工藝簡單、成本低，而且可以得到性能穩(wěn)定、緩釋外泌體的外泌體微球混懸液，從而便于存儲和保持外泌體的性能，因此在外泌體的存儲和組織培養(yǎng)領(lǐng)域具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請屬于生物提取工藝技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種外泌體微球混懸液及其制備方法。

背景技術(shù)

外泌體(Exosomes)是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡，一般指直徑在40～100nm的盤狀囊泡。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體，其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。目前，外泌提取方法有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等。

骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone mesenchymal stem cells，BMSCs)是人們在哺乳動物的骨髓基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的一種具有分化形成骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)及成肌細胞的多種分化潛能的細胞亞群。它們對骨髓中的造血干細胞(HSC)不僅有機械支持作用，還能分泌多種生長因子(如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等)來支持造血，因此BMSCs中的外泌體在骨微環(huán)境和骨代謝中發(fā)揮重要作用。

為了更好地研究外泌體，常將外泌體與目標物如組織細胞或支架材料一起培養(yǎng)，然而單純的外泌體存儲不方便，容易影響其作用，與目標物一起培養(yǎng)時外泌體通常難以正常發(fā)揮生物學(xué)功能。因此，現(xiàn)有技術(shù)有待改進。

發(fā)明內(nèi)容

本申請的目的在于提供一種外泌體微球混懸液及其制備方法，旨在解決解決現(xiàn)有如何更好地存儲外泌體，以便研究和發(fā)揮其性能的技術(shù)問題。

為實現(xiàn)上述申請目的，本申請采用的技術(shù)方案如下：

第一方面，本申請?zhí)峁┮环N外泌體微球混懸液的制備方法，包括如下步驟：

獲取外泌體；

配制多糖混懸液；

將所述外泌體和所述多糖混懸液進行混合處理得到混合溶液，將所述混合溶液進行噴霧處理得到顆粒微球；

將所述顆粒微球分散在膠原基質(zhì)溶液中得到外泌體微球混懸液。

在一實施例中，所述多糖混懸液選自殼聚糖混懸液。

在一實施例中，所述將所述混合溶液進行噴霧處理得到顆粒微球的步驟包括：將所述混合溶液通過4～6℃的恒溫噴頭，噴射在-20℃至-15℃的溫度環(huán)境中，得到所述顆粒微球。

在一實施例中，所述顆粒微球的粒徑為2～200μm。

在一實施例中，在得到所述顆粒微球后還包括：將所述顆粒微球依次經(jīng)過2000目篩和5000目篩，得到粒徑為2～6μm的所述顆粒狀微球。

在一實施例中，所述將所述顆粒微球分散在膠原基質(zhì)溶液中得到外泌體微球混懸液的步驟包括：先將所述顆粒微球溶于水中，然后按體積比1：18～20與所述膠原基質(zhì)溶液混合，得到所述外泌體微球混懸液。

在一實施例中，所述膠原基質(zhì)溶液的質(zhì)量分數(shù)為3.5～4.5％。

在一實施例中，所述外泌體來源于骨髓間充質(zhì)干細胞。

第二方面，本申請?zhí)峁┮环N外泌體微球混懸液，所述外泌體微球混懸液由本申請所述的制備方法制備得到。

在一實施例中，所述外泌體微球混懸液的存儲溫度為2～4℃。