[發明專利]檢測四種病原菌的RT-ddPCR試劑

在審

• 申請號: 202210339686.1
• 申請日: 2022-04-01
• 公開（公告）號: CN114592080A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 夏江;朱海濤
• 申請（專利權）人: 領航基因科技（杭州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

1.檢測銅綠假單胞菌的引物探針組，其包括：

如SEQ ID NO:1所示序列的上游引物、

如SEQ ID NO:2所示序列的下游引物、

和如SEQ ID NO:3所示序列的探針。

2.檢測大腸桿菌的引物探針組，其包括：

如SEQ ID NO:4所示序列的上游引物、

如SEQ ID NO:5所示序列的下游引物、

和如SEQ ID NO:6所示序列的探針。

3.檢測肺炎克雷伯菌的引物探針組，其包括：

如SEQ ID NO:7所示序列的上游引物、

如SEQ ID NO:8所示序列的下游引物、

和如SEQ ID NO:9所示序列的探針。

4.檢測鮑曼不動桿菌的引物探針組，其包括：

如SEQ ID NO:10所示序列的上游引物、

如SEQ ID NO:11所示序列的下游引物、

和如SEQ ID NO:12所示序列的探針。

5.根據權利要求1～4任一項所述的引物探針組，其特征在于，

如SEQ ID NO:3所示序列的探針的兩端分別修飾熒光基團FAM和淬滅基團BHQ1；

如SEQ ID NO:6所示序列的探針的兩端分別修飾熒光基團VIC和淬滅基團BHQ1；

如SEQ ID NO:9所示序列的探針的兩端分別修飾熒光基團ROX和淬滅基團BHQ2；

如SEQ ID NO:12所示序列的探針的兩端分別修飾熒光基團A425和淬滅基團BHQ1。

6.檢測四種病原菌的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1～5任一項所述的引物探針組。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，還包括RT-ddPCR檢測試劑和樣品前處理試劑，所述樣品前處理試劑包括Chelex裂解液。

8.非診斷目的檢測四種病原菌的方法，其特征在于，以權利要求6或7所述的試劑盒對樣品進行檢測，所述樣品為含有DNA和RNA的樣品。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述檢測的體系包括：

5×ddPCR Mix、樣品2μL、引物各0.15μL，探針各0.0375μL，水補足15μL以及2×ddPCRRT Mix 7.5μL、樣品2μL、引物各0.15μL，探針各0.0375μL，水補足15μL。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述檢測的程序包括：98℃5min，(98℃15s，60℃60s)×40以及42℃30min，98℃5min，(98℃15s，60℃60s)×40。