[發明專利]一種檢測搖頭丸成分的分子印跡型電化學傳感器制備方法

有效

• 申請號: 202210339073.8
• 申請日: 2022-04-01
• 公開（公告）號: CN114674886B
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發明（設計）人: 韓冬雪;李陳;牛利
• 申請（專利權）人: 廣州大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/30
• 代理公司: 廣州高炬知識產權代理有限公司 44376
• 代理人: 孔令環

1.一種檢測搖頭丸成分的分子印跡型電化學傳感器制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、實驗藥品的準備

實驗所用藥品有化學純度95%的3,4-亞甲基二氧苯乙胺鹽酸鹽(MDEA)、(±)-3,4-亞甲基二氧基苯丙胺(MDA)、(±)-3,4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)、(±)-甲基苯丙胺(MA)、鹽酸氯胺酮（Ketamine）和嗎啡（Morphine）、鹽酸多巴胺(DA)、蔗糖、甘露醇、維生素C、Na₂HPO₄·3H₂O、NaH₂PO₄、K₃[Fe(CN)₆]、K₄[Fe(CN)₆]·3H₂O、KCl、鹽酸、氫氧化鈉、硫酸；支持電解質為含有Na₂HPO₄、NaH₂PO₄、NaCl的0.1mol/L的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)，該PBS溶液pH7.5；氧化還原探針為在0.1?mol/L?KCl溶液中等比例混合的K₃[Fe(CN)₆]和K₄[Fe(CN)₆]?3H₂O的5?mmol/L?[Fe(CN)₆]^4-/3-；整個實驗過程均采用超純水；

S2、儀器設備的準備

實驗設備采用經典的三電極系統，工作電極為分子印跡聚合物修飾的金盤電極，參比電極為飽和Ag/AgCl電極，輔助電極為Pt絲；

S3、分子印跡聚合物修飾電極的制備

在聚合實驗前，金盤電極在麂皮上用不同粒度的氧化鋁粉末進行拋光并依次用Mill-Q水和乙醇超聲清洗，在室溫下干燥；隨后將5mmol/L?MDEA和5mmol/L?DA超聲預混后避光孵育一段時間，在溶液中連續通氮氣除氧后在金盤電極表面電化學聚合形成分子印跡聚合物膜，即MIP@PDA；電化學聚合過程通過循環伏安掃描完成，電位范圍為-0.5～0.5V，共掃描20個循環，最后將MIP@PDA修飾的電極浸入0.1mol/L氫氧化鈉中，去除模板分子和其他吸附物，最后使用Milli-Q水反復沖洗電極并在氮氣下干燥；作為對比，除不加入模板分子外以相同的合成步驟合成非分子印跡聚合物膜(NIP@PDA)；

S4、分子印跡聚合物修飾電極的表征

金盤電極經過MIP@PDA修飾后，在含有5mmol/L?[Fe(CN)₆]^4-/3-和0.1mol/L?KCl的PBS緩沖液，中通過CV、EIS和DPV對電極在不同修飾步驟下的電化學行為進行表征，通過SEM對MIP@PDA修飾前后電極表面的形貌進行表征；所述的PBS緩沖液濃度為0.01mol/L，pH7.5；

S5、實驗參數優化

為獲得分析性能最佳的分子印跡型電化學傳感器，優化功能單體與模板分子的比例、印跡聚合物薄膜厚度、洗脫劑種類和洗脫時間的實驗參數；

S6、傳感器的分析性能測試

將10?μL不同濃度的MDA和MDMA滴到修飾的電極表面，結合30min，用超純水洗滌三次并在氮氣下干燥；然后在含有5mmol/L[Fe(CN)₆]^4-/3-的PBS緩沖液中分別檢測DPV信號；

S7、傳感器的選擇性測試

通過電化學測試手段，測試分子印跡型電化學傳感器對其它甲基苯丙胺、嗎啡、氯胺酮毒品分子以及藥片輔料干擾物質的DPV響應，并與檢測MDA和MDMA的信號進行對比；非印跡型電化學傳感器同樣進行以上測試，用于排除非特異性吸附的影響；

S8、傳感器的穩定性和重現性測試

通過電化學測試手段，測試不同存儲時間下分子印跡型電化學傳感器對含有1μmol/LMDA待測樣的電化學DPV響應，用于評估該分子印跡型電化學傳感器檢測信號的穩定性；測試由五個在相同制備條件下制備的電極組成的分子印跡型電化學傳感器對含有1μmol/LMDA待測樣的電化學DPV響應，評估該分子印跡型電化學傳感器檢測信號的重現性；

S9、傳感器的實用性測試

選取健康成年志愿者的晨尿，用0.22?μm的微孔過濾器去除不溶物后，分別加入0.50?μmol/L、1.00?μmol/L和5.00?μmol/L的MDA和MDMA，制得含有搖頭丸成分的實際尿液樣品進行加標回收實驗，通過測量分子印跡型傳感器對上述樣品的電化學響應評估該傳感器的實際應用能力。