[發(fā)明專利]一種羊胎盤多肽及其制備方法和應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2022-04-01
• 公開（公告）號: CN114592024A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 翟勝利;吳自敏
• 申請（專利權(quán)）人: 珠海市華喜生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 六安市新圖匠心專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34139
• 代理人: 朱小杰

本發(fā)明公開了一種羊胎盤多肽及其制備方法和應(yīng)用，屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)領(lǐng)域。它包括以下步驟：(1)羊胎盤的處理；(2)酶解法制備羊胎盤多肽；(3)羊胎盤酶解液的脫腥。試驗表明，通過對胃蛋白酶與木瓜蛋白酶進行篩選確定最優(yōu)的酶解工藝為：木瓜蛋白酶5‰，pH6.40，55℃酶解6小時，10000rpm離心20min。釀酒酵母發(fā)酵脫腥最佳條件：酵母液5％，28℃振蕩培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時，不同提取條件下的酶解液均有不同程度的抗氧化活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種改進的羊胎盤多肽。

背景技術(shù)

羊胎盤是母羊孕育胎兒時負責(zé)母體、胎兒血液和養(yǎng)分交換的組織，能夠產(chǎn)生較多活性物質(zhì)，其營養(yǎng)組成與人類胎盤接近。羊胎盤含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素、脂多糖、活性多肽、生長因子、多種氨基酸和微量元素等成分以及與免疫功能和維持機體正常運轉(zhuǎn)相關(guān)的抗體等，能夠被很好的吸收。據(jù)《本草綱目》記載，胎盤又稱胞衣或紫河車，味甘、咸、溫，入肺、肝、腎三經(jīng)，有溫中益氣、養(yǎng)陰補血、美容養(yǎng)顏、防癌、抗衰老、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、提高機體免疫力等多種功效，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)療保健、食品、化妝品等領(lǐng)域。在瑞士羊胎盤提取液已經(jīng)被添加運用到化妝品的生產(chǎn)中，同時，一些國內(nèi)研究學(xué)者也將羊胎盤抗氧化肽應(yīng)用到部分抗衰老的化妝品中。由于抗氧化肽具有良好的抗氧化活性、高穩(wěn)定性、易吸收、安全營養(yǎng)等優(yōu)點，成為近年來國內(nèi)外研究的熱點。

胎盤肽，又稱為胎盤免疫活細胞素、胎盤免疫調(diào)節(jié)肽、胎盤轉(zhuǎn)移因子、胎盤免疫調(diào)節(jié)因子，胎盤免疫調(diào)節(jié)肽是目前研究較深入的胎盤提取物，其成分和穩(wěn)定性與提取時所采取的工藝有關(guān)。胎盤免疫調(diào)節(jié)肽屬于小分子物質(zhì)，是小分子量核苷酸以及肽類物質(zhì)的混合物，分子量小于5000Da，含有多種氨基酸。周國華等報道，胎盤肽為無色或微黃透明液體，含有多種氨基酸，具有可透性，可超濾性，蛋白質(zhì)反應(yīng)陰性，無抗原性等多種特性，凍干品通常為白色疏松狀粉末，且極易溶于水。

酶解法是目前大規(guī)模制備生物活性肽的常用方法，通過加入蛋白酶來達到對蛋白質(zhì)進行適度的水解。酶解法的原理是利用蛋白酶的專一性、高效性、選擇性等特點。酶解過程一般都是在相對比較溫和的環(huán)境中進行，酶解過程雖難以控制，但酶解法也因安全性高、條件溫和、成本較低等優(yōu)勢而受到廣泛重視。

本文以羊胎盤為原料，采用酶解法制備羊胎盤多肽，對其進行蛋白質(zhì)含量測定、脫腥處理，同時比較不同條件提取羊胎盤肽的抗氧化活性。

發(fā)明內(nèi)容

1、要解決的問題

針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供一種羊胎盤多肽的制備方法和應(yīng)用，具體來說：發(fā)明目的：比較兩種不同蛋白酶提取羊胎盤多肽的得率，同時篩選出最優(yōu)工藝，并對不同條件下的提取物進行脫腥處理、蛋白質(zhì)含量測定、抗氧化活性比較；發(fā)明方法：采用蛋白酶酶解羊胎盤，釀酒酵母對酶解液進行脫腥處理，通過隨機尋找34人對脫腥后的酶解液進行評比打分，然后超濾得到不同分子量的酶解液，用凱氏定氮儀測定蛋白質(zhì)含量，最后用抗氧化活性測定試劑盒進行測定活性；結(jié)論：通過對胃蛋白酶與木瓜蛋白酶進行篩選確定最優(yōu)的酶解工藝為：木瓜蛋白酶5‰，pH 6.40，55℃酶解6小時，10000rpm離心20min。釀酒酵母發(fā)酵脫腥最佳條件：酵母液5％，28℃振蕩培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時，不同提取條件下的酶解液均有不同程度的抗氧化活性。

2、技術(shù)方案

為解決上述問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案。

一種羊胎盤多肽的制備方法，包括以下步驟：

(1)羊胎盤的處理

羊胎盤室溫解凍，清水沖洗后用75％的乙醇浸泡30min，剪碎，瀝干水分，稱重后倒入破壁機中，加入生理鹽水進行搗碎得到羊胎盤勻漿；

(2)酶解法制備羊胎盤多肽