[發明專利]抗Tim-3納米抗體及其應用

有效

• 申請號: 202210337559.8
• 申請日: 2022-04-01
• 公開（公告）號: CN114478778B
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 韓根成;李葛;周潔;莫榮亮;李宇翔;王智鼎;高振芳;郝瑩;陳金婕;侯春梅;馮健男
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12P21/02;A61K39/395;A61K47/68;A61P35/00;A61P35/02;A61P25/00;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 高倩倩

本發明公開了抗Tim?3納米抗體及其應用，所述納米抗體具有如SEQ ID NO：1~3所示的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列。本發明同時提供了編碼所述單克隆抗體的核酸分子、含有所述核酸分子的表達載體和宿主細胞。本發明的納米抗體具有較高的結合活性以及中和活性。

技術領域

本發明屬于細胞免疫學、基因工程領域，涉及一種抗Tim-3納米抗體及其應用。

背景技術

Tim-3屬于免疫球蛋白超家族，是一種I型跨膜糖蛋白，由1個膜遠端可變免疫球蛋白區域（immunoglobulin variable region，IgV）和1個膜近端黏蛋白區域組成，前者是TIM-3發揮抑制性功能的主要結構。其最初見于輔助性T細胞（helper T cell 1，Thl）的表面，后來在CD4+T細胞、CD8+T細胞、細胞毒性淋巴細胞（cytotoxic lymphocyte，CTL）、調節性T細胞（regulatory t cell, Treg ）、腫瘤浸潤淋巴細胞（tumor infiltratinglymphocyte，TIL）、單核/巨噬細胞、自然殺傷細胞（natural killer ce11,NK）和樹突狀細胞（dendritic cell，DC）上亦被發現。

Tim-3被證明與多種疾病相關，最初發現Tim-3與多種自身免疫性疾?。ㄗ陨砻庖咝阅X脊髓炎、I型糖尿病和多發性硬化癥）中抑制T細胞功能相關（Kiyasu J, Miyoshi H,Hirata A, et al. Expression of programmed cell death ligand 1 is associatedwith poor overall survival in patients with diffuse large B-ce111ymphoma[J].Blood,2015,126（19）:2193-2201.）。后續研究接連發現Tim-3在胃癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、急性髓系白血病、慢性淋巴細胞白血病、多發性骨髓瘤、乳腺癌、宮頸癌、膀胱癌等多種腫瘤中表達上調，并與不良預后相關。在國內，曹陽等（曹陽.淋巴瘤血管內皮細胞異常表達Tim-3：一種新的腫瘤免疫逃避機制的探索研究[D].華中科技大學，2009.）最早利用通過體內外實驗發現淋巴瘤的血管內皮細胞高表達Tim-3蛋白，可能參與淋巴瘤新生血管的形成和免疫逃逸，最終促進淋巴瘤的生長與播散。后來張麗等（張麗.PD-1和TIM-3在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達及其對細胞增殖與凋亡的影響[D].山東大學，2016）證實TIM-3的表達水平隨著化療療程增多而下降，且與化療的有效率相關，是DLBCL患者化療敏感的指標，也因此成為影響預后的因子。近期的研究表明Tim-3抗體也能夠發揮抗病毒性腦炎作用（Li G, TangLL,Hou CM, et al. Peripheral Injection of Tim-3 Antibody Attenuates VSVEncephalitis by Enhancing MHC-I Presentation[J]. Front Immunol,2021, 12:667478）。

納米抗體（nanobody, Nbs）是一種重組抗體片段，大小約為15 kDa，發現于駱駝、羊駝等駝科體內，是駝科中的重鏈抗體的可變區，又稱為單域抗體（variable domain ofheavy chain of heavy-chain antibody，VHH），其僅由兩條H鏈組成，缺失L鏈。Nbs具有良好的生物和理化性質，其體積小、結構簡單、易于表達、耐熱、特異性強。隨著人們對納米抗體的不斷深入探索，其在生物技術和安全檢測、臨床治療等各領域得到廣泛應用。研究抗Tim-3的抗體對于疾病的檢測和治療具有重要的意義。

發明內容

為了彌補現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種納米抗體，所述納米抗體具有較高的親和活性與結合活性，能夠有效的檢測Tim-3，防治Tim-3相關疾病。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：