[發明專利]一種可以分泌漆酶的工程菌株及其構建方法與應用

在審

• 申請號: 202210337447.2
• 申請日: 2022-03-31
• 公開（公告）號: CN114807067A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 張天元;邵雄俊;薛怡蕓
• 申請（專利權）人: 蘇州聚維元創生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/74;C12N1/21;C12P19/00;C12R1/145
• 代理公司: 天津市君硯知識產權代理有限公司 12239
• 代理人: 高文迪

1.一種可以分泌漆酶的工程菌株，其特征在于：所述工程菌株為帶有用于重組表達漆酶基因Tfu_1114的熱纖梭菌工程菌株。

2.根據權利要求1所述的工程菌株，其特征在于：所述菌株為將熱纖梭菌cel9K中SEQID No:1的核苷酸序列替換為漆酶基因Tfu_1114重組得到的工程菌。

3.根據權利要求2所述的工程菌株，其特征在于：所述漆酶基因Tfu_1114的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示。

4.根據權利要求1所述的工程菌株，其特征在于：所述漆酶基因Tfu_1114來源于褐色高溫雙岐菌(Thermobifida fusca)YX的漆酶基因Tfu_1114。

5.權利要求1所述的可以分泌漆酶的工程菌株的構建方法，其特征在于：將漆酶基因Tfu_1114導入熱纖梭菌基因組上，構建重組表達該基因的熱纖梭菌工程菌，得到可以分泌纖維膨脹蛋白的工程菌株。

6.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于：以熱纖梭菌野生菌株為出發菌株，通過替換熱纖梭菌基因組上cel9K基因的部分序列構建融合蛋白來表達漆酶基因Tfu_1114，其中cel9K基因中被替換的基因序列如SEQ ID No:1所示，漆酶基因Tfu_1114的基因序列如SEQ ID No:2所示。

7.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于：所述熱纖梭菌為熱纖梭菌(Clostridium thermocellum)PN2102，保藏日期為2021年07月09日，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC No.22869。

8.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于：包括步驟：(1)設計及構建插入漆酶基因Tfu_1114的重組質粒pPN01；(2)將重組質粒pPN01轉入熱纖梭菌，從而將目的基因Tfu_1114的序列插入熱纖梭菌的基因組；(3)挑選陽性單克隆并PCR驗證后培養得到所述熱纖梭菌工程菌株。

9.權利要求1所述的可以分泌漆酶的工程菌株在木質纖維素水解中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：將熱纖梭菌工程菌的厭氧發酵發酵液復配其它纖維素酶對秸稈纖維進行水解。