[發(fā)明專利]一種表達(dá)狂犬病毒G蛋白的重組黑猩猩源腺病毒及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210333959.1
• 申請(qǐng)日: 2022-03-30
• 公開（公告）號(hào): CN114591922A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊軍;鄧飛;鄭飛;劉璐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長睿生物技術(shù)（成都）有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/01
• 分類號(hào): C12N7/01;C12N15/47;C12N15/861;A61K39/205;A61P31/14
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 宋南

1.一種表達(dá)狂犬病毒G蛋白的重組黑猩猩源腺病毒，其特征在于，其包括：KE、AK、XA和PX片段的AdC68基因組序列，AdC68基因組中第594-3513位之間插入連接序列以替換第594-3513位之間E1的部分序列，所述PX片段包含密碼子優(yōu)化后的Gp基因、WPRE轉(zhuǎn)錄后調(diào)控元件。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組黑猩猩源腺病毒，其特征在于，所述密碼子優(yōu)化后的Gp基因如SEQ ID NO.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組黑猩猩源腺病毒，其特征在于，所述連接序列如SEQ IDNO.2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組黑猩猩源腺病毒，其特征在于，所述重組黑猩猩源腺病毒的KE、AK、XA和PX片段的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.3-6所示。

5.一種如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的重組黑猩猩源腺病毒的制備方法，其特征在于，其包括：將密碼子優(yōu)化后的Gp基因、WPRE轉(zhuǎn)錄后調(diào)控元件與包含連接序列、KE、AK、XA和PX片段的AdC68載體進(jìn)行連接。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括先將密碼子優(yōu)化后的Gp基因和WPRE轉(zhuǎn)錄后調(diào)控元件進(jìn)行酶切連接，獲得重組中間載體1，經(jīng)酶切，將所述密碼子優(yōu)化后的Gp基因和WPRE轉(zhuǎn)錄后調(diào)控元件連入腺病毒穿梭載體中，獲得重組中間載體2。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括將所述中間載體2用SceI和CeuI進(jìn)行雙酶切，然后連入包含連接序列、KE、AK、XA和PX片段的AdC68載體中。

8.一種狂犬疫苗，其特征在于，由權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的重組黑猩猩源腺病毒感染病毒生產(chǎn)細(xì)胞，經(jīng)病毒包裝獲得。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的狂犬疫苗，其特征在于，所述病毒生產(chǎn)細(xì)胞選自293T細(xì)胞、293FTX細(xì)胞、Huh7細(xì)胞或HEK293細(xì)胞。

10.一種狂犬疫苗的制備方法，其特征在于，將權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的重組黑猩猩源腺病毒感染病毒生產(chǎn)細(xì)胞，經(jīng)病毒在細(xì)胞內(nèi)包裝，獲得具有免疫原性的狂犬疫苗。