[發明專利]功能性肺血管床的再生

在審

• 申請號: 202210333760.9
• 申請日: 2016-09-09
• 公開（公告）號: CN114672451A
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 任息;H·C·奧特
• 申請（專利權）人: 通用醫療公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/077;C12M3/00;C12M1/34;C12M1/36;C12M1/12
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

本發明涉及功能性肺血管床的再生。一種用于血管再生的方法，該方法包括將內皮細胞遞送至肺支架，將血管周細胞遞送至該肺支架，并向該支架提供多階段培養程序。該多階段培養程序包括第一階段和第二階段，該第一階段包括遞送血管生成培養基，該血管生成培養基例如具有40ng/ml?100ng/ml促血管生成因子，并且該第二階段包括遞送穩定化培養基，該穩定化培養基例如具有0.5％?2％血清和1ng/ml?20ng/ml血管生成因子。

本申請是中國專利申請201680066181.5的分案申請，原申請201680066181.5的申請日為2016年09月09日，其名稱為“功能性肺血管床的再生”。

技術領域

本披露涉及功能性肺血管床的再生。

背景技術

對于患有末期肺病的患者，肺移植是一種有效的治療選擇。然而，供體數量并不能滿足日益增長的需求，而慢性免疫抑制和排斥反應的影響限制了長期結果。肺移植的典型等待時間可以為兩年或更長時間，導致等待名單上的人的死亡率為30％。

發明內容

本披露至少部分是基于以下設備(例如，生物反應器)和方法的開發，這些設備和方法能夠通過遞送細胞并用內皮和血管周細胞重新填充無細胞肺支架的血管隔室來再生功能性肺血管床并使用多階段培養程序使該肺血管床成熟。實現方式可以包括以下特征中的一個或多個。

在第一方面，本文提供了用于血管再生的方法，這些方法包括將內皮細胞遞送至肺支架；將血管周細胞遞送至該肺支架；并且向該支架提供多階段培養程序，該多階段培養程序包括：第一階段，該第一階段包括遞送具有40-100ng/ml促血管生成因子的血管生成培養基；以及第二階段，該第二階段包括遞送具有0.5％-2％血清和1ng/ml-20ng/ml血管生成因子的穩定化培養基。

在一些實施例中，這些促血管生成因子包括重組人VEGF、bFGF、ANG1、EGF和PDGF中的至少一種或多種，例如，兩種、三種、四種或全部五種。

在一些實施例中，該穩定化培養基包括毛喉素和/或氫化可的松中的至少一種。

在一些實施例中，這些方法包括將該肺支架維持在圍繞該肺支架的生物反應器中，該生物反應器包括氣管管線、動脈管線和靜脈管線。在一些實施例中，該肺支架包括氣道和脈管系統，并且該方法包括將該氣道連接至該氣管管線；將該肺支架連接至該動脈管線和該靜脈管線；并且經該動脈管線和該靜脈管線對該肺支架接種細胞。

本文還提供了用于血管再生的方法，這些方法可以包括將HUVEC和血管周支持性hMSC遞送至肺支架；在第一階段期間將血管生成培養基遞送至該肺支架；并在第二階段期間將穩定化培養基遞送至該肺支架。

在一些實施例中，這些方法包括將該肺支架維持在圍繞該肺支架的生物反應器中，該生物反應器包括氣管管線、動脈管線和靜脈管線，其中通過該動脈管線和該靜脈管線遞送這些HUVEC和這些血管周支持性hMSC。

此外，本文提供了用于從人類誘導多能干細胞(hiPSC)中分化內皮細胞和血管周細胞的方法。這些方法包括在至少一種GSK3抑制劑的存在下培養這些hiPSC；在完全分化培養基的存在下培養這些hiPSC；用補充有TGF-β1抑制劑的該分化培養基培養這些hiPSC；并分離hiPSC衍生的血管周祖細胞(hiPSC-PPC)和hiPSC衍生的內皮細胞(hiPSC-EC)。

在一些實施例中，該至少一種GSK3抑制劑是CHIR99021。在一些實施例中，該至少一種TGF-β1抑制劑是SB431542。

在一些實施例中，這些方法包括維持4％或更少O₂的低氧培養條件。

在一些實施例中，這些方法包括包括測量由CD31和VE-鈣粘蛋白表達定義的內皮覆蓋度的增加平臺期，以指示足夠的血管和第一階段培養的結束。