[發明專利]花鱸腦細胞系及其建立方法與應用

有效

• 申請號: 202210333561.8
• 申請日: 2022-03-31
• 公開（公告）號: CN114736863B
• 公開（公告）日: 2023-06-16
• 發明（設計）人: 劉振興;馬艷平;郝樂
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院動物衛生研究所
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12N7/00;C12Q1/02;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/91
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 王秉麗

本發明提供一種花鱸腦細胞系及其應用，通過選用花鱸魚苗的腦組織，并采用合適的濃度的胰酶以及設置合理的消化條件，分離得到花鱸腦細胞，并首次建立了花鱸腦細胞系LMB?S，其主要表現為纖維樣細胞，可以穩定傳代超過60代，本發明的花鱸腦細胞系在病毒學、毒理、生理、分子遺傳學以及發育生物學領域具有很高的研究及應用價值，例如：在病毒的鑒定與毒株分離中的應用，在制備預防或治療虹彩病毒的疫苗中的應用，作為用于藥物篩選、藥物制備、藥物評價的生物模型中的應用等。

技術領域

本發明屬于細胞生物學領域，特別涉及一種花鱸腦細胞系及其建立方法與應用。

背景技術

花鱸(Lateolabrax?maculatus)隸屬于鱸形目(Perciformes)，鮨科(Serranidae)，花鱸屬(Lateolabrax)是一種廣溫、廣鹽性近岸中下層魚類，廣泛分布于中國、朝鮮、日本等地?；|屬包含3個種，分別為高體鱸(L.latus)、日本鱸(L.japonicus)和花鱸(L.maculatus)。中國花鱸(L.maculatus)與日本鱸(L.japonicus)長期被認為屬于同一個物種。后續在針對花鱸屬的分類學、形態學的不斷研究中，證明中國花鱸(L.maculatus)與日本鱸(L.japonicus)屬于不同物種，后來在遺傳學與分子生物學方面的研究也進一步支持了這一觀點?；|年養殖量超過18萬噸，是我國重要的海水養殖對象。

魚類細胞系是進行病毒學、毒理、生理、分子遺傳學以及發育生物學等研究的重要基礎材料。目前，雖然已有針對日本鱸(L.japonicus)的細胞系建立的相關研究，但是即便是同一物種的遺傳結構、遺傳多樣性和遺傳差異，也是不容忽視的，不同的物種的生物學特性存在較大的差異，不同的魚類細胞系更是具有不同的優勢或局限性，而目前花鱸(L.maculatus)的腦細胞系建立及其應用研究仍處于空白。因此，有必要提供一種花鱸腦細胞系及其應用，以豐富可以用于病毒學、毒理、生理、分子遺傳學以及發育生物學等研究的魚類細胞系種類。

發明內容

基于此，本發明的目的包括提供一種花鱸腦細胞系及其應用。

為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：

一種花鱸腦細胞系，保藏編號為CCTCC?NO：C2018167。該細胞系已于2018年8月23日保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC?NO：C2018167，郵政編碼為430072；該細胞系于2018年8月23日由保藏中心收到并登記入冊，保藏中心于2018年8月30日檢測完畢，結果為存活。

本發明還提供了上述保藏編號為CCTCC?NO:C2018167的花鱸腦細胞系的建立方法，具體技術方案如下：

保藏編號為CCTCC?NO:C2018167的花鱸腦細胞系的建立方法，包括以下步驟：

(1)取花鱸魚苗的腦組織，洗滌、剪碎，胰酶消化；所述胰酶消化為：向花鱸魚苗腦組織中加入0.04％～0.06％胰酶，于25±1℃消化14～16min后，于25±1℃、250～300g離心5±1min，棄上清，重懸；

(2)將步驟(1)消化得到的細胞采用含10％～15％胎牛血清的DMEM培養基，于25±1℃培養，得原代花鱸腦細胞；

(3)將原代花鱸腦細胞，采用含10％～15％胎牛血清的DMEM培養基，于25±1℃培養，傳代至超過50～60代后，得到花鱸腦細胞系LMB-S。

在其中一些實施例中，所述胰酶消化為：于25±1℃消化14～16min后，于25±1℃、200～300g離心5±1min，棄上清，重懸，即得；

所述重懸為：使用含有體積百分比為10％～15％的胎牛血清重懸細胞沉淀。

本發明還提供一種上述保藏編號為CCTCC?NO:C2018167的花鱸腦細胞的應用，具體技術方案如下：