[發明專利]靶向新冠病毒的納米抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210330386.7
• 申請日: 2022-03-31
• 公開（公告）號: CN114478757B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 王繼剛;李志杰;王惠芳;鄭六海;耿慶山;鐘曉茹;楊傳彬;孫繼超;戴凌云
• 申請（專利權）人: 深圳市人民醫院
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C40B30/04;A61K39/42;A61P31/14;A61P11/00;G01N33/569
• 代理公司: 深圳壹舟知識產權代理事務所(普通合伙) 44331
• 代理人: 歐志明

本發明公開了一種靶向新冠病毒的納米抗體及其制備方法和應用，所述納米抗體包括納米抗體NbN2、納米抗體NbN3、納米抗體NbN4、納米抗體NbN5、納米抗體NbN6、納米抗體NbN11中的至少一種，提供的納米抗體對新冠病毒野生株、新冠病毒變異株阿爾法（Alpha）、新冠病毒貝塔（Beta）、新冠病毒德爾塔（Delta）、新冠病毒Omicron及其亞型BA.2的RBD結構域具有較高的親和力，能夠快速且特異性地中和不同的新冠病毒，有效抑制其活性；同時，提供的納米抗體具有更長的CDR3序列，有利于納米抗體進行靈活調節其構象，提高與病毒的結合作用，有利于廣泛應用。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種靶向新冠病毒的納米抗體及其制備方法和應用。

背景技術

新型冠狀病毒肺炎（Corona Virus Disease 2019，COVID-19）可通過飛沫傳播、接觸呼吸道分泌物、氣溶膠傳播等途徑傳播，帶來的后果十分嚴重。引起COVID-19的急性呼吸系統綜合癥冠狀病毒2（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2) 主要表達4種結構蛋白，分別為刺突蛋白(spike，S)、包膜蛋白(envelope)、膜蛋白(membrane)和核衣殼蛋白(nucleocapsid)。其中S蛋白包括N 端的S1亞基和 C 末端的S2亞基，S1亞基包含大約200個氨基酸的受體結合域 (receptor binding domain，RBD)負責病毒與宿主受體結合，S2亞基負責病毒與宿主細胞膜融合。S蛋白在病毒附著、感染和傳播中發揮至關重要的作用，通過與宿主細胞的血管緊張素轉化酶2（angiotensin convertingenzyme2，ACE2）結合進而感染細胞，是抗SARS-CoV-2藥物研發的重要靶點。

中和抗體是對抗COVID-19的重要療法。已有研究發現通過給重癥COVID-19 患者輸送康復者的血清能夠顯著改善臨床結果，表明中和抗體療法對新冠重癥患者也有較好的緩解作用。其作用機理為中和抗體與新冠病毒表面的刺突糖蛋白結合進而影響SARS-CoV-2與宿主細胞的表面受體結合，從而使病毒無法感染靶細胞。目前已有多個中和抗體獲批上市用于COVID-19的治療，這些單抗靶點主要集中在S蛋白的RBD結構域。然而，面對不斷突變的SARS-CoV-2，已有中和抗體很難靶向新的新冠變異株。最近的一項研究表明，omicron亞型BA.2可逃避幾乎所有的中和抗體治療。因此，迫切需要開發出新的可以同時靶向不同新冠變異株特別是omicron及其亞型BA.2的中和抗體。

發明內容

本申請的目的在于提供一種靶向新冠病毒的納米抗體及其制備方法和應用，旨在解決現有技術中缺乏新冠變異株Omicron及其亞型BA.2的中和抗體的問題。

為實現上述申請目的，本申請采用的技術方案如下：

第一方面，本申請公開了一種靶向新冠病毒的納米抗體，納米抗體包括納米抗體NbN2、納米抗體NbN3、納米抗體NbN4、納米抗體NbN5、納米抗體NbN6、納米抗體NbN11中的至少一種，其中，納米抗體NbN2的氨基酸序列如Seq.ID NO.1所示，納米抗體NbN3的氨基酸序列如Seq.ID NO.2所示，納米抗體NbN4的氨基酸序列如Seq.ID NO.3所示，納米抗體NbN5的氨基酸序列如Seq.ID NO.4所示，納米抗體NbN6的氨基酸序列如Seq.ID NO.5所示，納米抗體NbN11的氨基酸序列如Seq.ID NO.6所示。

第二方面，本申請公開了一種靶向新冠病毒的納米抗體的制備方法，包括如下步驟：

提供目的蛋白，將目的蛋白包被在免疫管上進行富集篩選，得到噬菌體文庫；

將噬菌體文庫的洗脫液進行二代測序，并根據測序結果合成原始計數占比前10的納米抗體的基因序列；

將納米抗體的基因序列克隆至表達載體中得到重組質粒，將重組質粒轉入宿主細胞中誘導表達并進行純化，得到靶向新冠病毒的納米抗體。