[發(fā)明專(zhuān)利]一種活性提高的Cas蛋白以及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210314807.7
• 申請(qǐng)日: 2022-03-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114410609B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王林;褚洪官;賈楠楠
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 舜豐生物科技（海南）有限公司;山東舜豐生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N9/22
• 分類(lèi)號(hào): C12N9/22;C12N15/55;C12N15/85;C12N15/113
• 代理公司: 北京君慧知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11716
• 代理人: 劉曉佳

1.一種優(yōu)化的Cas突變蛋白，所述突變蛋白與親本Cas蛋白的氨基酸序列相比，在對(duì)應(yīng)于SEQ ID No.1所示氨基酸序列的以下任一或任意幾個(gè)氨基酸位點(diǎn)處存在突變：第417位、第638位；所述第417位氨基酸突變?yōu)镵，所述第638位氨基酸突變?yōu)镹。

2.一種融合蛋白，所述融合蛋白包括權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白以及其他的修飾部分。

3.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸為編碼權(quán)利要求1所述Cas突變蛋白的多核苷酸序列，或編碼權(quán)利要求2所述融合蛋白的多核苷酸序列。

4.一種載體，其特征在于，所述載體包含權(quán)利要求3所述的多核苷酸以及與之可操作連接的調(diào)控元件。

5.一種CRISPR-Cas系統(tǒng)，其特征在于，所述系統(tǒng)包括權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白以及至少一種gRNA；

所述gRNA包括能夠結(jié)合權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白的同向重復(fù)序列和能夠靶向靶序列的引導(dǎo)序列。

6.一種組合物，其特征在于，所述組合物包含：

(i) 蛋白組分，其選自：權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白或權(quán)利要求2所述的融合蛋白；

(ii) 核酸組分，其為gRNA，所述gRNA包括能夠結(jié)合權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白的同向重復(fù)序列和能夠靶向靶序列的引導(dǎo)序列；

所述蛋白組分與核酸組分相互結(jié)合形成復(fù)合物。

7.一種活化的CRISPR復(fù)合物，所述活化的CRISPR復(fù)合物包含：

(i) 蛋白組分，其選自：權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白或權(quán)利要求2所述的融合蛋白；

(ii) 核酸組分，其為gRNA，所述gRNA包括能夠結(jié)合權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白的同向重復(fù)序列和能夠靶向靶序列的引導(dǎo)序列；

(iii)結(jié)合在（ii）中所述gRNA上的靶序列。

8.一種工程化的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞包含權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白，或權(quán)利要求2所述的融合蛋白，或權(quán)利要求3所述的多核苷酸，或權(quán)利要求4所述的載體。

9.權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白，或權(quán)利要求2所述的融合蛋白，或權(quán)利要求3所述的多核苷酸，或權(quán)利要求4所述的載體，或權(quán)利要求5所述的CRISPR-Cas系統(tǒng)，或權(quán)利要求6所述的組合物，或權(quán)利要求7所述的活化的CRISPR復(fù)合物，或權(quán)利要求8所述的宿主細(xì)胞在基因編輯中的應(yīng)用，所述應(yīng)用為非疾病診斷和治療目的的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述基因編輯為基因靶向或基因切割。

11.權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白，或權(quán)利要求2所述的融合蛋白，或權(quán)利要求3所述的多核苷酸，或權(quán)利要求4所述的載體，或權(quán)利要求5所述的CRISPR-Cas系統(tǒng)，或權(quán)利要求6所述的組合物，或權(quán)利要求7所述的活化的CRISPR復(fù)合物，或權(quán)利要求8所述的宿主細(xì)胞在制備用于基因編輯的試劑或試劑盒中的用途。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于，所述基因編輯為基因靶向或基因切割。

13.權(quán)利要求1所述的Cas突變蛋白，或權(quán)利要求2所述的融合蛋白，或權(quán)利要求3所述的多核苷酸，或權(quán)利要求4所述的載體，或權(quán)利要求5所述的CRISPR-Cas系統(tǒng)，或權(quán)利要求6所述的組合物，或權(quán)利要求7所述的活化的CRISPR復(fù)合物，或權(quán)利要求8所述的宿主細(xì)胞在編輯靶核酸或核酸檢測(cè)中的應(yīng)用，所述應(yīng)用為非疾病診斷和治療目的的應(yīng)用。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其特征在于，所述編輯靶核酸選自切割雙鏈DNA、單鏈DNA或單鏈RNA，非特異性切割和/或降解側(cè)枝核酸，或靶向靶核酸。