[發明專利]一種多重改性透明質酸衍生物的制備方法

在審

• 申請號: 202210306731.3
• 申請日: 2022-03-25
• 公開（公告）號: CN114716580A
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 王云云;宋文俊;王昕宇;張紅晨;王坤;何志遠;舒曉正
• 申請（專利權）人: 常州百瑞吉生物醫藥有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 戴廣志

本發明公開了一種多重改性透明質酸衍生物的制備方法，可同時在透明質酸的側鏈引入氨基和巰基，且有效避免了形成交聯結構，具有制備工藝簡單，試劑用量少，適合工業化生產等特點。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，特別涉及一種多重改性透明質酸衍生物的制備方法。

背景技術

透明質酸是細胞基質和多種組織的重要組成成分，具有多種重要的生理學功能，例如：調節細胞增殖、遷移和分化，天然的保濕作用，潤滑關節保護軟骨，調節蛋白質合成，調節炎癥反應，調節免疫功能，促進傷口愈合等。透明質酸獨特的黏彈性、生物相容性和可降解性使其在生物醫學領域有廣泛的應用，包括作為眼科手術助劑、外科手術后防粘連劑、皮膚創傷愈合再生助劑、藥物載體、組織工程支架等。

然而，透明質酸在體內易被降解吸收，滯留時間較短，這大大限制了其在生物醫學領域的應用。例如，注射入皮膚或關節后，其半衰期不超過24h(Brown等，Exp Physiol1991,76:125-134)。因此需要對透明質酸進行化學改性，賦予其更為優良的機械強度、流變學特性及抗酶解能力等，擴大其在生物醫學領域的應用范圍。

透明質酸的側鏈上有羧基、羥基兩種官能團可供進行偶聯反應,但這兩種官能團的反應效率低，反應條件苛刻。例如，透明質酸的羥基在強堿性時才具有一定的親核反應活性，反應條件苛刻(劉等，CN106589424A)，會導致透明質酸顯著的主鏈水解斷裂；透明質酸的羧基通常只能在碳化二亞胺等的活化與特定的基團(氨基)進行偶聯反應，反應局限性很大 (Nakajima等，Bioconjugate Chem 1995，6：123-130)。

對透明質酸的羧基和/或羥基進行化學改性，制備具有更高反應活性官能團的衍生物，可有效拓展其在生物醫藥領域的應用，具有很多優勢。例如，透明質酸巰基化衍生物可以在氧氣的作用下形成原位交聯水凝膠，具有不需要交聯劑、不含雜質、生物相容性好等許多優點 (Shu等，Biomacromolecules 2002,3:1304-1311)；同時，透明質酸巰基化衍生物亦可以與聚乙二醇二丙烯酸酯等生物相容交聯劑實現快速原位交聯，無反應雜質，可用于細胞的原位包埋，在組織再生修復領域具有重要前景(Shu等，Biomaterials 2004,25:1339-1348)。

然而，目前的透明質酸衍生物通常只具有一種高反應活性官能團，不利于擴大其在生物醫學領域的應用范圍。具有多個高反應活性官能的透明質酸衍生物在制備多重交聯透明質酸水凝膠、與各種小分子抗癌藥物制備透明質酸-藥物偶合物進行腫瘤靶向治療等方面具有更好的靈活性和優勢。然而對透明質酸的側鏈進行不同改性，使其添加不同的活性官能團，則存在一定的困難，因為先添加引入的高反應活性官能團通常可能會干擾參與后續的改性反應，而影響后續活性基團的引入。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種多重改性透明質酸衍生物的制備方法，可在透明質酸的側鏈同時引入巰基和氨基以得到具有兩種高反應活性官能團的透明質酸衍生物。

為解決上述技術問題，本發明提供的多重改性透明質酸衍生物的制備方法，包括如下步驟：

S1、透明質酸側鏈羧基在第一活化劑存在的條件下與二胺化合物反應，得到的產物中包括具有含有氨基的側鏈的透明質酸衍生物；

S2、步驟S1得到的產物，其側鏈羧基在第二活化劑存在的條件下與二硫代二酰肼化合物反應，得到的產物中包括具有含氨基的側鏈和具有含二硫鍵二酰肼結構的側鏈的透明質酸衍生物；

S3、步驟S2得到的產物與還原劑反應，將二硫鍵還原為巰基，純化后得到同時具有含氨基的側鏈和含巰基的側鏈的透明質酸衍生物。