[發(fā)明專利]一種大口黑鱸虹彩病毒的亞單位疫苗及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210303316.2
• 申請日: 2022-03-24
• 公開（公告）號: CN114748617A
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周勝;張澤妙;秦啟偉;黃友華;魏京廣;黃曉紅;寧運尚;梁增健
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué);嶺南現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)與技術(shù)廣東省實驗室
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K39/39;A61P31/20;C12N15/70;C12N15/66;C12N15/34;C12P21/02;C07K14/01
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

本發(fā)明公開了一種大口黑鱸虹彩病毒的疫苗及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的大口黑鱸虹彩病毒的疫苗是SEQ ID No.1所示的核苷酸序列編碼的蛋白。其是構(gòu)建質(zhì)粒pET21a?LMBV并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，誘導(dǎo)表達并破碎細胞后回收純化重組蛋白，即為大口黑鱸虹彩病毒的疫苗。可以將重組蛋白rMCP與佐劑混合，所得疫苗混合液具有對大口黑鱸虹彩病毒LMBV免疫保護的作用。本發(fā)明的大口黑鱸虹彩病毒的疫苗其免疫效果穩(wěn)定，相對保護率較高，具有高效保護性，可應(yīng)用于大口黑鱸養(yǎng)殖過程中保護魚苗及成魚對抗大口黑鱸虹彩病毒感染。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)及免疫學(xué)領(lǐng)域，具體涉及到一種具有免疫保護性的大口黑鱸虹彩病毒重組蛋白亞單位疫苗及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

大口黑鱸是一種經(jīng)濟價值高的淡水魚類,近年來大口黑鱸養(yǎng)殖規(guī)模擴大,中國年產(chǎn)量已經(jīng)超過50萬噸，產(chǎn)值超過100億元。但隨著養(yǎng)殖環(huán)境日益惡化，各種病害特別是病毒性疾病頻繁爆發(fā)，造成了重大的經(jīng)濟損失。大口黑鱸虹彩病毒(Large mouth bass virus,LMBV)是大口黑鱸的重要致病病原，它造成大口黑鱸的死亡率高。這種病毒極易感染大口黑鱸，且流行廣泛，致使苗期大口黑鱸成活率低，成魚養(yǎng)殖在高溫期容易爆發(fā)該虹彩病毒病，造成嚴重經(jīng)濟損失。因此，如何防治虹彩病毒病已成為當今大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)急需解決的重要問題。

眾所周知，疫苗作為化學(xué)藥品和抗生素的替代品，是治療疾病、特別是病毒病的最好選擇。疫苗接種是防治病毒曼延的有效手段，包括滅活疫苗、DNA核酸疫苗、減毒疫苗和重組蛋白亞單位疫苗等。針對大口黑鱸虹彩病毒LMBV，已經(jīng)有研究報導(dǎo)全病毒滅活疫苗、DNA核酸疫苗。制備全病毒滅活疫苗需要進行細胞培養(yǎng)、病毒擴增，對細胞培養(yǎng)技術(shù)、設(shè)備使用及培養(yǎng)基、材料如血清等消耗要求較高；由于在制備全病毒滅活疫苗過程中可能存在病毒抗原丟失、抗原結(jié)構(gòu)被破壞而造成免疫效果不穩(wěn)定。DNA核酸疫苗雖然制備比較簡單，且可產(chǎn)生持久免疫應(yīng)答，但核酸DNA可能誘導(dǎo)產(chǎn)生自身免疫反應(yīng)，持續(xù)表達外源抗原，可能導(dǎo)致機體對該抗原產(chǎn)生免疫耐受。重組蛋白亞單位疫苗絕對不含活毒成分，生產(chǎn)和使用過程無散毒可能，消除了污染的可能性，且免疫特異性強、重復(fù)性較好，可以通過發(fā)酵大規(guī)模生產(chǎn)，成本較低，是值得積極推廣使用的安全疫苗。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對病毒基因結(jié)構(gòu)與功能的研究深入，研制基因工程重組蛋白亞單位疫苗日趨成熟，是國內(nèi)外發(fā)展的主要方向，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種人和動物疫苗的生產(chǎn)。目前沒有針對大口黑鱸虹彩病毒LMBV的重組亞單位疫苗報道。因此研發(fā)該病毒的重組亞單位疫苗產(chǎn)品，能夠在低成本條件下大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用，快速、安全、有效預(yù)防控制該病毒的傳播，從而保障大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的第一個目的是提供一種疫苗穩(wěn)定，保護率高的大口黑鱸虹彩病毒的亞單位疫苗。

本發(fā)明的大口黑鱸虹彩病毒的亞單位疫苗，其特征在于，所述的大口黑鱸虹彩病毒的亞單位疫苗是SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列編碼的蛋白。

進一步優(yōu)選，所述的SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列編碼的蛋白與佐劑Montanide^TM ISA 763A VG混合形成大口黑鱸虹彩病毒的亞單位疫苗。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種大口黑鱸虹彩病毒的亞單位疫苗的制備方法，其特征在于，將SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列轉(zhuǎn)入到表達載體中，再將此表達載體轉(zhuǎn)入宿主菌中，表達SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列編碼的蛋白，然后純化收集此蛋白，即得大口黑鱸虹彩病毒的亞單位疫苗。

優(yōu)選，所述的表達載體為質(zhì)粒pET-21a。

優(yōu)選，所述的宿主菌為大腸桿菌BL21(DE3)。

進一步優(yōu)先，所述的大口黑鱸虹彩病毒的亞單位疫苗是通過以下方法制備的：