[發(fā)明專利]一種利用多能干細(xì)胞誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210301828.5
• 申請日: 2022-03-25
• 公開（公告）號: CN114672455A
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 項鵬;李偉強(qiáng);韋伊利;王濱
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0735;C12N5/10;A61K35/28;A61P7/00;A61P7/06;A61P19/08
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

1.一種骨髓基質(zhì)細(xì)胞，其特征在于，所述骨髓基質(zhì)細(xì)胞是由多能干細(xì)胞誘導(dǎo)為體壁中胚層細(xì)胞后在基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液連續(xù)傳代培養(yǎng)得到的。

2.一種體壁中胚層細(xì)胞來源的骨髓基質(zhì)細(xì)胞，其特征在于，所述體壁中胚層細(xì)胞來源的骨髓基質(zhì)細(xì)胞由多能干細(xì)胞，經(jīng)歷體壁中胚層細(xì)胞階段后誘導(dǎo)得到。

3.一種多能干細(xì)胞誘導(dǎo)為體壁中胚層細(xì)胞的培養(yǎng)液，其特征在于，所述培養(yǎng)液為含有GSK-3抑制劑和BMP信號通路激活劑組合的基礎(chǔ)培養(yǎng)液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)液，其特征在于，所述GSK-3抑制劑為LY2090314、SB216763、CHIR99021和CHIR99021 HCl中的一種或幾種；所述BMP信號通路激活劑為BMP2、BMP4或BMP7中的一種或幾種。

5.一種骨髓基質(zhì)細(xì)胞無血清完全培養(yǎng)液，其特征在于，所述培養(yǎng)液為含有1～10％(V/V)血清替代物、1～5％(V/V)NEAA、1～5％(V/V)ITS培養(yǎng)添加劑、1～10mM L-谷氨酸、0.1～10Mm的β-巰基乙醇、1～100ng/mL bFGF、1～100ng/mL EGF、1～100ng/mL VEGF、0.1～10mg/ml人血小板衍生生長因子、0.1～10mg/ml維生素C、和0.1～5mM尿苷Uridine的基礎(chǔ)培養(yǎng)液。

6.權(quán)利要求3到4任一所述培養(yǎng)液和/或權(quán)利要求5所述骨髓基質(zhì)細(xì)胞無血清完全培養(yǎng)液在多能干細(xì)胞誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞中的應(yīng)用。

7.一種利用多能干細(xì)胞誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.將多能干細(xì)胞誘導(dǎo)為中內(nèi)胚層細(xì)胞：將多能干細(xì)胞解離分散后接種于包被基質(zhì)膠的培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中，利用含有CHIR99021的培養(yǎng)液培養(yǎng)1～3天后，即得到中內(nèi)胚層細(xì)胞；

S2.將中內(nèi)胚層細(xì)胞誘導(dǎo)為體壁中胚層細(xì)胞：利用權(quán)利要求3或4所述多能干細(xì)胞誘導(dǎo)為體壁中胚層細(xì)胞的培養(yǎng)液，培養(yǎng)上一步的產(chǎn)物5～7天后，即得到體壁中胚層細(xì)胞；

S3.將體壁中胚層細(xì)胞誘導(dǎo)為體壁中胚層細(xì)胞來源骨髓基質(zhì)細(xì)胞：將得到的體壁中胚層細(xì)胞重新消化接種于骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液后，用骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液連續(xù)傳代培養(yǎng)6～8次后，即得到體壁中胚層細(xì)胞來源骨髓基質(zhì)細(xì)胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液為權(quán)利要求5所述的骨髓基質(zhì)細(xì)胞無血清完全培養(yǎng)液或市售商業(yè)化MSC培養(yǎng)液。

9.權(quán)利要求7或8所述方法制備得到的骨髓基質(zhì)細(xì)胞。

10.權(quán)利要求1、2或8任一所述的骨髓基質(zhì)細(xì)胞在制備具有促進(jìn)造血支持和/或骨修復(fù)的藥物的應(yīng)用。