[發明專利]一種瞬時轉染試劑及其應用

有效

• 申請號: 202210301557.3
• 申請日: 2022-03-24
• 公開（公告）號: CN114561413B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發明（設計）人: 董衛華;王天云;張俊河;郭瀟;米春柳;耿少雷;林艷
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/85
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 李寧

本發明涉及一種瞬時轉染試劑及其應用，屬于細胞生物學和生物技術領域。本發明的瞬時轉染試劑，包括聚乙烯亞胺鹽酸鹽溶液、氯化鈉溶液和氯化鎂溶液；聚乙烯亞胺鹽酸鹽溶液的濃度為0.8～1.2mg/mL，pH為6.9～7.1，聚乙烯亞胺鹽酸鹽為PEI?MAX?40K；氯化鈉溶液的濃度為4.8～5.3mol/L；氯化鎂溶液的濃度為0.8～1.2mol/L。本發明的瞬時轉染試劑用于細胞轉染時，具有較高的轉染效率。由于聚乙烯亞胺鹽酸鹽的濃度較低，本發明的瞬時轉染試劑具有較低的毒性。本發明的瞬時轉染試劑是一種價廉、毒性小、轉染效率高的瞬時轉染試劑，可用于重組蛋白生產和基因治療等方面。

技術領域

本發明涉及一種瞬時轉染試劑及其應用，屬于細胞生物學和生物技術領域。

背景技術

基因治療的關鍵是如何高效地將基因遞送到目標細胞內。基因遞送載體包括病毒載體和非病毒載體。病毒載體的遞送效率遠遠高于非病毒載體，但病毒引起的免疫毒性及致癌性等潛在危害已成為其臨床應用的障礙。近年來，高效、低毒、具生物相容性的非病毒基因載體逐步成為基因治療載體研究的熱點。常用的非病毒載體有陽離子脂質體與聚合物兩類。其中，由于具有較高的轉染效率，以Lipo2000為代表的陽離子脂類化合物經過三十多年的發展和完善，被廣泛應用于體外基因轉染實驗。但這類化合物也有明顯的缺點，例如，當Lipo2000用于人體實驗時，會迅速從血清中被清除并在肺部聚集，誘導炎癥反應，導致高水平的毒性等。相比之下，陽離子聚合物載體的研究只有不到十年的歷史，但陽離子聚合物的毒性較低，生物相容性優于脂質體類載體，是非病毒基因治療載體研究的新方向。

聚乙烯亞胺(polyethylenimine，PEI)是目前人們研究最多的一種陽離子聚合物。PEI能夠與DNA形成納米級的復合物，很容易被細胞吞噬。PEI將DNA帶入細胞后，能夠促進復合物從內含體釋放，具有很高的轉染效率。PEI的毒性與其相對分子質量密切相關，低相對分子質量的PEI幾乎無轉染效率，隨著相對分子質量的增高，PEI的基因轉染效率也逐步上升，但PEI的毒性也隨著相對分子質量的增加而上升。為了獲得較高的轉染效率，通常采用濃度較高的高分子量PEI作為瞬時轉染試劑，但是這種瞬時轉染試劑存在毒性較大的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種瞬時轉染試劑，用于解決目前采用濃度較高的高分子量PEI作為瞬時轉染試劑時存在毒性較大的問題。

本發明的另一個目的在于提供一種瞬時轉染試劑在細胞轉染中的應用。

為了實現上述目的，本發明的瞬時轉染試劑所采用的技術方案為：

一種瞬時轉染試劑，包括聚乙烯亞胺鹽酸鹽溶液、氯化鈉溶液和氯化鎂溶液；聚乙烯亞胺鹽酸鹽溶液的濃度為0.8～1.2mg/mL，pH為6.9～7.1，聚乙烯亞胺鹽酸鹽為PEI?MAX40K；氯化鈉溶液的濃度為4.8～5.3mol/L；氯化鎂溶液的濃度為0.8～1.2mol/L。

優選地，上述瞬時轉染試劑包括聚乙烯亞胺鹽酸鹽溶液、氯化鈉溶液和氯化鎂溶液；聚乙烯亞胺鹽酸鹽溶液的濃度為1mg/mL，pH為7.0，聚乙烯亞胺鹽酸鹽為PEI?MAX?40K；氯化鈉溶液的濃度為5mol/L；氯化鎂溶液的濃度為1mol/L。

優選地，當瞬時轉染試劑包括聚乙烯亞胺鹽酸鹽溶液、氯化鈉溶液和氯化鎂溶液時，使用時，所述聚乙烯亞胺鹽酸鹽溶液、氯化鈉溶液和氯化鎂溶液的體積比為4:7.5:0.6。

一種瞬時轉染試劑，包括溶液A和溶液B；

所述溶液A為聚乙烯亞胺鹽酸鹽溶液，濃度為0.9～1.1mg/mL，pH為6.9～7.1，聚乙烯亞胺鹽酸鹽為PEI?MAX?40K；溶液B為氯化鈉和氯化鎂的混合溶液，氯化鈉的濃度為4.5～5.5mol/L，氯化鎂的濃度為0.05～0.1mol/L；