[發明專利]人DEFB126基因移碼突變檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202210290758.8
• 申請日: 2022-03-23
• 公開（公告）號: CN114606310A
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 施惠娟;雷向東
• 申請（專利權）人: 上海市生物醫藥技術研究院;上海境象生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/113
• 代理公司: 北京卓恒知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11394
• 代理人: 唐曙暉

1.一種用于檢測人β防御素126基因(DEFB126)的移碼突變位點rs11467417、rs11467497的基因型的人DEFB126基因移碼突變檢測試劑盒，其包括：

(1)依據rs11467417位點的兩側序列設計的特異性引物；

(2)依據rs11467497位點的兩側序列設計的特異性引物；

(3)依據rs11467417位點的鄰近序列設計的特異性探針；

(4)依據rs11467497位點的鄰近序列和突變前后的位點序列分別設計的探針；

(5)PCR反應試劑；

任選的(6)陽性對照；

任選的(7)陰性對照，

其中，依據rs11467417位點的鄰近序列設計的特異性探針、依據rs11467497位點的鄰近序列和突變前后的位點序列分別設計的探針分別標記不同的熒光發光基團，該試劑盒利用一個PCR反應檢測移碼突變位點rs11467417、rs11467497的多個基因分型。

2.根據權利要求1所述的人DEFB126基因移碼突變檢測試劑盒，其特征在于，PCR反應試劑包括用于PCR擴增的Taq聚合酶、UNG、dNTP；

優選地，在每一單位的試劑盒中，Taq聚合酶為1-3單位，例如1單位、UNG酶為1-3單位，例如1單位、dNTP為0.2-0.6mM，例如0.4mM，引物濃度為0.02-1μM，進一步0.1-0.4μM，例如0.2μM。

3.根據權利要求1所述的人DEFB126基因移碼突變檢測試劑盒，其特征在于，野生型rs11467417位點的兩側序列(rs11467417上下游兩端部分序列)如序列表中序列1所示，突變型rs11467417位點的兩側序列(rs11467417上下游兩端部分序列)如序列表中序列2所示。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的人DEFB126基因移碼突變檢測試劑盒，其特征在于，野生型rs11467497位點的兩側序列(rs11467497上下游兩端部分序列)如序列表中序列3所示，突變型rs11467497位點的兩側序列(rs11467497上下游兩端部分序列)如序列表中序列4所示。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的人DEFB126基因移碼突變檢測試劑盒，其特征在于，陽性對照為二個位點雜合子含U的DNA，即Rs11467417PCR產物序列和Rs11467497PCR產物序列的T全部或部分用U替代的合成序列的混合液；優選地，還含有(例如10個單位的)UNG酶抑制劑UGI；

優選地，Rs11467417PCR產物序列如序列表中序列5所示，Rs11467497PCR產物序列如序列表中序列6所示。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的人DEFB126基因移碼突變檢測試劑盒，其特征在于，依據rs11467417位點的兩側序列設計的特異性引物的堿基序列為如序列表中序列7(5號端引物)和序列8(3號端引物)所示；和/或

其特征在于，依據rs11467497位點的兩側序列設計的特異性引物的堿基序序列表中序列9(5號端引物)和序列10(3號端引物)所示。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的人DEFB126基因移碼突變檢測試劑盒，其特征在于，依據rs11467417位點的鄰近序列設計的特異性探針的堿基序列如序列表中序列11所示；和/或依據rs11467497位點的鄰近序列和突變前后的位點序列分別設計的探針的序列如序列表中序列12和13所示。

8.根據權利要求1-7中任一項所述的人DEFB126基因移碼突變檢測試劑盒，其特征在于，依據rs11467417位點的鄰近序列設計的特異性探針標記VIC熒光基團；rs11467497突變前序列探針標記CY5熒光基團，rs11467497突變后序列探針標記FAM熒光基團。