[發(fā)明專利]一種腎損傷分子（KIM-1）測(cè)定試劑盒及其檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210290190.X
• 申請(qǐng)日: 2022-03-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114778846A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周婉婷;張麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/545
• 代理公司: 天津翰林知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12210
• 代理人: 付長(zhǎng)杰

本發(fā)明公開(kāi)了一種腎損傷分子(KIM?1)測(cè)定試劑盒及其檢測(cè)方法，該試劑盒包括試劑1(R1)、試劑2(R2)和校準(zhǔn)品；所述試劑1由以下組分組成：緩沖液、無(wú)機(jī)鹽、穩(wěn)定劑、表面活性劑、防腐劑；所述試劑2由以下組分組成：緩沖液、穩(wěn)定劑、KIM?1單抗膠乳微球、防腐劑；所述校準(zhǔn)品由以下組分組成：緩沖液、無(wú)機(jī)鹽、穩(wěn)定劑、KIM?1抗原、防腐劑。本申請(qǐng)的試劑盒具有靈敏度高、檢測(cè)范圍寬、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，能夠在全自動(dòng)生化分析儀上實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)，替代酶聯(lián)免疫試劑盒，降低操作難度、減少檢測(cè)時(shí)間，可簡(jiǎn)便、快速實(shí)現(xiàn)人血清、尿液中腎損傷分子(KIM?1)濃度的定量檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫分析領(lǐng)域，具體涉及一種腎損傷分子(KIM-1)測(cè)定試劑盒。

背景技術(shù)

KIM-1是一種1型跨膜蛋白，分子量為104KD，分為胞外區(qū)，跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)。其胞外部分由一個(gè)含6個(gè)胱氨酸的類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，2個(gè)N糖基化位點(diǎn)和1個(gè)富含蘇氨酸/ 絲氨酸和脯氨酸的結(jié)構(gòu)域組成，具有典型的粘蛋白樣O-糖基化蛋白特征。其胞內(nèi)區(qū)很短，但至少含有1個(gè)酪氨酸磷酸化位點(diǎn)，可通過(guò)磷酸化酪氨酸殘基進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。當(dāng)發(fā)生腎損傷時(shí)，腎損傷分子l的細(xì)胞外域在金屬基質(zhì)蛋白酶的作用下可在跨膜區(qū)附近裂解為可溶性片段(90KD)釋放人細(xì)胞外，并排人尿中。

KIM-1最初被發(fā)現(xiàn)是一種上皮細(xì)胞粘附因子，含有一個(gè)新的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，在正常情況下不表達(dá)，但在損傷后近端小管頂膜細(xì)胞中明顯升高。由于腎損傷分子1(KIM-1)只在損傷的腎小管上皮細(xì)胞中表達(dá)，很多研究結(jié)果都認(rèn)為其可以成為一個(gè)敏感的腎損傷標(biāo)記物。在小鼠實(shí)驗(yàn)中結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是缺血性腎損傷還是藥物毒性腎損傷，血清、尿中腎損傷分子 l(KIM-1)的水平測(cè)定可作為早期腎臟損害的重要指標(biāo)之一。而當(dāng)腎損傷程度減輕或經(jīng)干預(yù)治療后，尿中腎損傷分子l水平則會(huì)下降。與此同時(shí)，腎損傷分子1(KIM-1)還能對(duì)腎損傷的預(yù)后提供預(yù)測(cè)價(jià)值。

越來(lái)越多的研究已經(jīng)在各種缺血、腎毒性和腎移植等所致急性腎損傷(Acutekidneyinjury， AKI)的動(dòng)物模型中證實(shí)KIM-1可以作為早期、無(wú)創(chuàng)和特異的AKI診斷標(biāo)志物。KIM-1作為新的候選AKI早期診斷標(biāo)志物，有其優(yōu)勢(shì)：①敏感性高，其在正常組織不表達(dá)，AKI發(fā)生時(shí)，其在近端小管上皮細(xì)胞的表達(dá)才顯著上調(diào)，并一直持續(xù)到細(xì)胞完全康復(fù)；②特異性很高，特別是對(duì)缺血性或腎毒性AKI特異性更高，在其他器官很少表達(dá)；③其胞外部分脫落進(jìn)入尿液后性質(zhì)比較穩(wěn)定，容易檢測(cè)；④極少受到慢性腎臟疾病和尿路感染的影響。

國(guó)內(nèi)已申請(qǐng)專利的檢測(cè)技術(shù)包括膠體金免疫層析法(公開(kāi)號(hào)CN206772984U)、酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法(公開(kāi)號(hào)CN104730250A)和化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CN107942072A)。膠體金免疫層析法，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)方面，但靈敏度、線性、重復(fù)性和定量準(zhǔn)確性較差，目前更多運(yùn)用于疾病初步篩查。ELISA法技術(shù)成熟，檢測(cè)費(fèi)用較低，但靈敏度和線性范圍較差，操作復(fù)雜，重復(fù)性較差；即便采用全自動(dòng)酶免分析儀，檢測(cè)速度仍然較慢，無(wú)法滿足臨床快速定量檢測(cè)需求。化學(xué)發(fā)光免疫分析法靈敏度較高、特異性強(qiáng)、測(cè)定范圍寬、操作簡(jiǎn)單，易于自動(dòng)化，但需要專門的設(shè)備，成本較高。且現(xiàn)有的膠乳免疫透射比濁法(PETIA)對(duì)于KIM-1 的檢測(cè)來(lái)說(shuō)其線性范圍和靈敏度不能同時(shí)滿足要求，需要進(jìn)一步改進(jìn)。

目前，雖然檢測(cè)KIM-1的方法多種，但還沒(méi)有一種既能夠降低操作難度、減少檢測(cè)時(shí)間、控制檢測(cè)成本，又能夠提高檢測(cè)靈敏度、線性、準(zhǔn)確度和重復(fù)性，且適合生化分析儀的檢測(cè)方法，如能建立該種方法，能夠簡(jiǎn)便、快速、大批量且定量的進(jìn)行樣本檢測(cè)，對(duì)于疾病的防治意義重大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有方法及技術(shù)的缺陷，提供靈敏度高、線型范圍寬、重復(fù)性好的一種腎損傷分子(KIM-1)測(cè)定試劑盒及其檢測(cè)方法，線性可達(dá)80-5000pg/mL，可進(jìn)行血尿同檢，該試劑盒適用于各類型生化分析儀。本發(fā)明采用的是在膠乳微球上標(biāo)記抗體，來(lái)檢測(cè)抗原。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：