[發(fā)明專利]企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210279043.2
• 申請日: 2022-03-21
• 公開（公告）號: CN114517199B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發(fā)明（設計）人: 于非非;曲炳良;魯義善;余祥勇;鐘智明;陳家宇;林金姬
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N15/53;C12N5/10
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

本發(fā)明公開了企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子及其應用。本發(fā)明提供了一種企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子，并在此基礎上，提供了一種利用該啟動子篩選鑒定Mitf轉錄因子的方法。本發(fā)明克服了目前尚未有用于篩選鑒定企鵝珍珠貝Mitf轉錄因子的啟動子及方法的缺陷，對于企鵝珍珠色澤調(diào)控和選擇育種具有重要意義。

技術領域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)科學和基因工程技術領域，更具體地，涉及企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子及其應用。

背景技術

企鵝珍珠貝(Pteria?penguin)是一種用于培育大型海水珍珠的優(yōu)質(zhì)母貝，其黑色素的表達水平可影響珍珠質(zhì)的色澤，進而影響珍珠質(zhì)量。為培育色彩特異的珍珠，可通過調(diào)控企鵝珍珠貝黑色素合成信號通路基因的表達水平來調(diào)控黑色素的合成，從而影響企鵝珍珠貝珍珠質(zhì)色澤及殼色，為突破珍珠貝色澤優(yōu)化關鍵技術和稀有色澤珍珠的培育奠定基礎。

企鵝珍珠貝黑色素的合成具有復雜的信號通路。其中，酪氨酸酶(Tyr)是關鍵的限速酶，能夠催化黑色素合成的三個關鍵步驟。小眼畸形相關轉錄因子(Mitf)是哺乳動物黑色素合成的核心轉錄因子，Mitf可結合到Tyr基因啟動子的M-box或E-box上激活Tyr表達，促進黑色素形成。如果說Tyr是命令的行使者，Mitf則是運籌帷幄的決策者。Mitf作為黑色素合成核心轉錄因子，自身也被其他上游基因調(diào)控，這些上游基因是黑色素合成信號通路的重要因子，可通過調(diào)控Mitf的表達，影響Tyr的表達，最終影響黑色素合成水平。因此，挖掘Mitf的轉錄因子，對于黑色素合成通路的構建具有重要理論意義，對于突破珍珠貝色澤優(yōu)化關鍵技術具有重要生產(chǎn)意義。而為便于篩選鑒定相關的轉錄因子，有必要提供一種篩選鑒定企鵝珍珠貝Mitf的轉錄因子的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術問題是克服現(xiàn)有上述技術的缺陷和不足，提供一種企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子及其應用。

本發(fā)明的第一個目的是提供一種企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種含有企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子的重組載體。

本發(fā)明的第三個目的是提供一種含有企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子的重組載體的重組細胞。

本發(fā)明的第四個目的是提供所述啟動子，所述重組載體和/或所述重組細胞在篩選/鑒定企鵝珍珠貝Mitf基因的轉錄因子中的應用。

本發(fā)明的第五個目的是提供一種篩選/鑒定企鵝珍珠貝Mitf基因的轉錄因子的方法。

本發(fā)明上述目的通過以下技術方案實現(xiàn)：

本發(fā)明提供了一種企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

本發(fā)明通過構建SEQ?ID?NO.1所示啟動子驅(qū)動的熒光素酶報告基因重組載體，驗證了該啟動子為Mitf基因的強啟動子。在此基礎上，本發(fā)明利用構建所得的啟動子驅(qū)動的熒光素酶報告基因重組載體，構建了Mitf基因的轉錄因子的篩選鑒定方法，克服了目前尚未有用于篩選鑒定企鵝珍珠貝Mitf的轉錄因子的啟動子及方法的缺陷。

因此，本發(fā)明申請保護所述企鵝珍珠貝Mitf基因的啟動子，其核苷酸序列如SEQID?NO.1所示。

本發(fā)明還申請保護一種重組載體，所述載體中含有SEQ?ID?NO.1所示啟動子的核苷酸序列。

為便于測定SEQ?ID?NO.1所示啟動子的活性，或利用該重組載體進行Mitf基因的轉錄因子的篩選與鑒定，所述重組載體為帶有熒光素報告基因的載體。

具體地，所述載體為SEQ?ID?NO.1所示啟動子驅(qū)動的熒光素酶報告基因重組載體。

在本發(fā)明的實施例中，所用載體為pGL3-Basic熒光素報告基因載體。