[發明專利]一株豬δ冠狀病毒強毒株及其在疫苗制備中的應用

有效

• 申請號: 202210278623.X
• 申請日: 2022-03-21
• 公開（公告）號: CN114790448B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 方六榮;肖少波;方譜縣;周艷榮;馬俊;盧佑新;彭旋;張譽瀚
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 張立強

本發明屬于動物病毒學與動物傳染病學技術領域，具體涉及一株豬δ冠狀病毒強毒株和該毒株在疫苗制備中的應用。本發明從臨床發生腹瀉仔豬的小腸內容物中分離到一株PDCoV，命名為豬δ冠狀病毒DHeB1株，將其保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:V202217，該PDCoV DHeB1具有更高的增殖滴度、更強的致病性和更好的免疫原性，可用于制備PDCoV滅活疫苗。

技術領域

本發明屬于動物病毒學與動物傳染病學技術領域。具體涉及一株豬δ冠狀病毒強毒株和該毒株在疫苗制備中的應用。

背景技術

豬δ冠狀病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)屬于冠狀病毒科、δ冠狀病毒屬，由中國香港學者于2011年從豬糞便中檢測到，但當時并未對其進行深入的研究，也未說明其臨床意義。2014年，美國俄亥俄州的豬場首次暴發PDCoV感染，并迅速蔓延到20多個州。至此，PDCoV開始受到研究者的關注。隨后，韓國、加拿大、中國、越南、老撾、泰國等 10多個國家或地區相繼報道了PDCoV感染的發生與流行。目前，PDCoV感染在多個養豬國家廣泛存在，給養世界豬業造成了較大的經濟損失。

PDCoV對不同品種和日齡的豬均易感，但對仔豬的危害最大，感染仔豬主要表現為嘔吐、腹瀉、脫水甚至死亡，其它日齡豬感染后臨床癥狀較輕或呈隱性感染。但泰國學者在2015年報道的病例證實PDCoV感染不僅能導致新生仔豬的大量死亡(死亡率高達64.27％)，而且也能導致母豬的死亡(死亡率為27.63％)，引起世界養豬業的高度關注(Janetanakit et al.Porcine Deltacoronavirus,Thailand,2015.Emerg Infect Dis,2016,22:757- 759.)。

最近的研究發現，PDCoV除了感染豬以外，還可以感染雞、牛、小鼠、火雞，甚至可以感染人，是一種潛在的人獸共患病病原。但目前尚無針對該病的疫苗和特效藥物，因此開展病毒的分離鑒定和疫苗的制備對預防和控制PDCoV感染十分重要。

申請公布號為CN 110747175A的中國發明專利申請，從豬腸道組織中分離，并經傳代純化獲得一株豬δ冠狀病毒P DC-SX19，其微生物保藏號為CGMCC No.18332。該分離株能夠在傳代細胞上穩定增殖，產生典型細胞病變。雖然該豬δ冠狀病毒分離株具有優異的免疫原性，采用該分離株制備的疫苗能夠誘導仔豬產生中和抗體，但是該豬δ冠狀病毒株致病力低，并不是制備PDCoV滅活疫苗的優選毒株。

發明內容

本發明的目的在于提供一株豬δ冠狀病毒強毒株DHeB1株，該毒株具有較高的增殖滴度、致病性和免疫原性。

本發明的另一個目的在于提供PDCoV DHeB1株用于制備豬δ冠狀病毒疫苗，所述疫苗優選為滅活疫苗。

為了達到上述目的，本發明采取以下技術措施：

從臨床發生腹瀉仔豬的小腸內容物中分離到一株PDCoV，命名為豬δ冠狀病毒DHeB1株，將該豬δ冠狀病毒強毒株保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:V202217。經與發明人所在實驗室分離的另兩株PDCoV(DHN株和DJX株)以及現有的PDCoV進行比較，發現PDCoV DHeB1具有更高的增殖滴度、更強的致病性和更好的免疫原性，是制備PDCoV滅活疫苗的優選毒株。該毒株的分離鑒定過程如下：

1.豬δ冠狀病毒DHeB1株的分離鑒定：無菌收集經RT-PCR檢測為PDCoV陽性的仔豬小腸內容物，處理后接種LLC-PK1細胞單層，經細胞病變觀察、RT-PCR檢測和間接免疫熒光(IFA)檢測證實獲得PDCoV，將其命名為PDCoV DHeB1株。