[發明專利]果糖基氨基酸氧化酶突變體及其應用和產品、基因、質粒和基因工程菌

在審

• 申請號: 202210274365.8
• 申請日: 2022-03-21
• 公開（公告）號: CN114350632A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 刁含文
• 申請（專利權）人: 南京巨匠生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/06
• 分類號: C12N9/06;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/72;C12Q1/26;C12R1/19
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 劉桐亞

本發明提供了一種果糖基氨基酸氧化酶突變體及其應用和產品、基因、質粒和基因工程菌，涉及生物技術領域。本發明提供的果糖基氨基酸氧化酶突變體，將果糖基氨基酸氧化酶的C端6個氨基酸切除。該果糖基氨基酸氧化酶突變體的比酶活力顯著提高，具有較好的熱穩定性和儲存穩定性，能夠用于糖化蛋白質，特別是糖化血紅蛋白的測定。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種果糖基氨基酸氧化酶突變體及其應用和產品、基因、質粒和基因工程菌。

背景技術

糖尿病作為目前常見的一種疾病之一，醫學上對此的檢測方法也不斷推陳出新。自通過酶法來測定糖化血紅蛋白(HbA1c)的方法問世一來之后，以此為基礎的測試實際不斷在開發之中。該方法是血液蛋白質中包含的糖化蛋白質，作為血糖控制標志物。糖化蛋白質是通過血液中存在的D-葡萄糖與構成血液蛋白質的氨基酸殘基反應產生的。血液蛋白質中的主要糖基化位點是賴氨酸殘基的ε-氨基和血液蛋白質氨基末端氨基酸的α-氨基。測定HbA1c時，測定D-葡萄糖與血紅蛋白β鏈的氨基末端氨基酸纈氨酸的α-氨基結合產生的糖化蛋白質的量。

果糖基氨基酸氧化酶及其使用方法技術是目前作為糖尿病檢測的主要的核心酶原料之一，基于果糖基氨基酸氧化酶開發的血液中的糖化蛋白質的檢測方法具備高效簡便性，目前也已有較多的商品化檢測試劑盒。在酶測定法中，首先，糖化蛋白質被蛋白酶水解；隨后，由此產生的果糖基纈氨酸、果糖基賴氨酸和果糖基纈氨酰組氨酸等糖化氨基酸被果糖基氨基酸氧化酶（以下簡稱“FAOD”）氧化水解；最后，由氧化酶反應產生的過氧化氫通過過氧化物酶-色原反應系統比色測定。在通過酶法測定糖化蛋白質時，作為主要反應酶的FAOD的底物特異性和穩定性是重要的因素。例如，在HbA1c的測定中，需要對果糖基纈氨酸具有高特異性的酶。此外，需要作用于果糖基纈氨酰組氨酸的酶以進行糖化血紅蛋白的β鏈特異性測定。這是因為血紅蛋白α鏈和β鏈的氨基末端氨基酸都是纈氨酸。因此，為了進行對β鏈、氨基末端的2個氨基酸殘基(即果糖基纈氨酰組氨酸)特異的測定，需要進行識別。

目前，已經從幾種絲狀真菌或其基因重組體中提取純化出作用于果糖基纈氨酰組氨酸的氧化酶（果糖基纈氨酰組氨酸氧化酶）。還分離了編碼該果糖基纈氨酰組氨酸氧化酶的基因。然而，傳統的果糖基纈氨酰組氨酸氧化酶的熱穩定性較差，需要進一步提高診斷試劑的長期儲存穩定性。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種果糖基氨基酸氧化酶突變體，以解決上述問題中的至少一種。

本發明的第二目的在于提供上述果糖基氨基酸氧化酶突變體在制備糖化蛋白質檢測產品中的應用。

本發明的第三目的在于提供一種糖化蛋白質檢測產品。

本發明的第四目的在于提供一種編碼果糖基氨基酸氧化酶突變體的基因。

本發明的第五目的在于提供一種重組質粒。

本發明的第六目的在于提供一種基因工程菌。

第一方面，本發明提供了一種果糖基氨基酸氧化酶突變體，將果糖基氨基酸氧化酶的C端6個氨基酸切除；

所述果糖基氨基酸氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

作為進一步技術方案，所述果糖基氨基酸氧化酶突變體的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

作為進一步技術方案，表達所述果糖基氨基酸氧化酶突變體的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

第二方面，本發明提供了一種果糖基氨基酸氧化酶突變體在糖化蛋白質檢測中的應用；

所述糖化蛋白質包括糖化血紅蛋白。

第三方面，本發明提供了一種糖化蛋白質檢測產品，包括上述果糖基氨基酸氧化酶突變體。