[發明專利]一株對核桃長足象具有強致病力的菌株及其應用

有效

• 申請號: 202210271025.X
• 申請日: 2022-03-18
• 公開（公告）號: CN114480145B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 趙玉雪;朱佳敏;楊霞;吳柳燕;蘇州
• 申請（專利權）人: 貴州省核桃研究所;羅甸縣果業產業化發展中心
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;A01N63/30;A01P7/04;C12R1/645
• 代理公司: 重慶智誠達邦專利代理事務所(普通合伙) 50289
• 代理人: 龔世妍

本發明涉及生物防治技術領域，公開了一株對核桃長足象具有強致病力的菌株及其應用，該菌株為球孢白僵菌，于2021年9月23日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏編號為CGMCC?NO：23261。本發明是首次從林間采集核桃長足象的僵蟲上分離獲得球孢白僵菌菌株，該菌株培養簡單、生長迅速、產孢量大、孢子萌發率高，并且通過實驗得知該菌株對核桃長足象成蟲有較強的致病力，并且環境友好、不易產生抗藥性，可以廣泛地應用于核桃長足象的生物防治。

技術領域

本發明涉及生物防治技術領域，尤其涉及一株對核桃長足象具有強致病力的菌株及其應用。

背景技術

核桃是我國重要的經濟樹種之一,其木材、果實、枝葉、果殼,都有很高的利用和開發價值，核桃產業被許多地區確立為地域經濟和新農村經濟發展的主導產業之一，核桃產業能促進農民增收、拉動地區經濟發展、同時改善生態環境,己在我國多個省份推廣。但由于盲目引進新品種,使得品種良莠不齊,加之栽培面積不斷擴大,果農放松管理,核桃病蟲害發生嚴重,其中核桃長足象是核桃蟲害的重要的蟲害之一，進而導致單株產量低,品質下降。

核桃長足象(AlcidodesjuglansChao)又名核桃果象甲、核桃象甲蟲等，隸屬鞘翅目象甲科,是核桃果實的重要鉆蛀性害蟲，屬于中度危險性林業有害生物,?在我國核桃產區均有分布。該蟲以幼蟲危害最嚴重，幼蟲在核桃果內取食種仁，導致果實脫落，嚴重時果樹絕收，這是影響核桃大量不正常落果減產的主要原因；成蟲啃食嫩葉、嫩梢及幼果皮，影響果樹生長，導致減產。

目前，對核桃長足象的防治方法主要采用人工檢拾落果、樹干注射、樹冠噴藥等方法。但是上述方法費時費力、產生食品安全問題、對環境污染重，因此探索一種高效、穩定、無污染的防治方法亟待解決。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一是提供對核桃長足象具有強致病力的球孢白僵菌菌株，所述菌株為球孢白僵菌Beauveriabassiana，所述菌株于2021年9月23日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，菌種保藏編號為CGMCCNO：?23261，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

所述菌株的ITS序列如SEQ?ID?NO.1所示。

本發明的目的之二是提供所述菌株的具體分離純化方法。

所述球孢白僵菌菌株是從核桃林采集的核桃長足象的僵蟲上分離獲得的，將核桃長足象浸于70％乙醇中消毒30s，然后用0.1％升汞消毒1.5min，再用滅菌水漂洗3次，用滅菌濾紙吸干核桃長足象成蟲體上的水分，然后放置于PDA平板中。在27℃恒溫培養箱中培養2-3d，至蟲體周圍長出菌絲后，挑取菌絲轉至新的PDA平板上，如此重復3次，然后用稀釋純化法對病菌進行單菌落分離。最終將分離純化的菌株保存于PDA斜面培養基上，置于4℃冰箱保存。其培養初期菌落呈白色長絨狀，背面無色，在光學顯微鏡下觀察，菌絲透明；但至培養的后期，菌落呈淡黃色粉末狀，菌落背面呈現淡黃色，而且菌絲和產孢細胞明顯減少，僅見膨大的不規則的泡囊增生，顯微鏡下大量孢子在泡囊表面聚集成圓球狀，分生孢子單孢，透明，多呈卵圓形，較大，直徑1.05*2.14-1.65*2.49μm。

本發明的目的之三是提供菌株在防治核桃長足象上的應用。具體應用為將所述球孢白僵菌菌株培養后制成孢子液、含孢子的菌劑，施用時菌株的孢子濃度為?1×10⁶孢子/mL-1×10⁸孢子/mL，以達到對核桃長足象的綠色防治。

本發明的有益效果：本發明是首次從感病的核桃長足象中分離獲得球孢白僵菌菌株，該菌株培養簡單、生長迅速、產孢量大、孢子萌發率高，并且通過實驗得知該菌株對核桃長足象成蟲、若蟲均有較強的致病力，并且環境友好、不易產生抗藥性，可以廣泛地應用于核桃長足象的生物防治。

附圖說明