[發明專利]一種IPTG誘導性缺失D1133L基因的非洲豬瘟病毒減毒株及其應用

有效

• 申請號: 202210258522.6
• 申請日: 2022-03-16
• 公開（公告）號: CN114958782B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 鄭海學;張克山;張婷;馮濤;楊博;楊行;史喜絹;田宏;茹毅;楊帆;朱紫祥;郭建宏;何繼軍;劉湘濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/34;C12N15/85;C12N15/65;C12R1/93
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 張立強

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種IPTG誘導性缺失D1133L基因的非洲豬瘟病毒減毒株及其應用。本發明首先發現了非洲豬瘟病毒D1133L蛋白能夠抑制IFN?β及其下游因子ISG?15、ISG?56細胞因子的產生，具有較強的免疫抑制作用，可作為免疫抑制劑應用。另外構建了IPTG誘導性缺失D1133L基因的非洲豬瘟病毒減毒株，具體是將大腸桿菌lac操縱基因?阻遏物系統將篩選表達盒插入到ASFV的非結構蛋白D1133L之前得到重組病毒。在存在IPTG的情況下，此重組病毒與野生型具有相似特征，無IPTG存在時，D1133L蛋白的表達會被抑制。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及IPTG誘導性敲除D1133L基因的非洲豬瘟病毒減毒株及其應用。

背景技術

非洲豬瘟（African swine fever, ASF）是由非洲豬瘟病毒（African swinefever virus, ASFV）感染引起的一種家豬和野豬烈性傳染病，該病發病過程短，病死率接近100%，被世界動物衛生組織（OIE）將其列為法定報告的動物疫病，我國也將其列為一類動物疫病。

非洲豬瘟病毒重組毒株以及相關疫苗的研制是應對非洲豬瘟的重要手段之一。

截止目前很多病毒的結構蛋白和一些非結構蛋白無法通過基因編輯技術直接敲除，導致無法明確該病毒蛋白在病毒復制過程中發揮的作用及裝配機制。ASFV編碼的D1133L基因屬于非結構蛋白，與牛痘病毒的D6R具有相似的解旋酶基序，屬于解旋酶，并且預測在病毒復制過程中發揮作用，D1133L屬于晚期表達基因。

Lac操縱子中編碼的酶在阻遏物——乳糖操縱子阻遏蛋白（lacrepressorlacI）負調控下，可以特異性的與乳糖操縱基因（lacoperatorLacO）結合并以高親和力與其21bp序列結合，阻遏酶的表達。乳糖操縱子阻遏蛋白（lacrepressorlacI）也可以與異乳糖或異丙基硫代半乳糖苷（inducer isopropyl b-D-thiogalactoside,IPTG）結合，從而降低阻遏物對操縱子的親和力，通過這種方式，IPTG可以減少Lac操縱子轉錄的抑制，從而誘導表達，該系統可以很好地調節哺乳動物細胞中轉染和整合基因的表達，同時也在應用在病毒領域，比如在Vaccinia Virus（VACV）病毒中已使用該系統可以用來研究病毒形態發生（MENG X,EMBRY A, ROSE L, et al. Vaccinia virus A6 is essential for virion membranebiogenesis and localization of virion membrane proteins to sites of virionassembly [J]. J Virol, 2012, 86(10): 5603-5613.），成為轉錄調控病毒蛋白與宿主互作的有力工具。

發明內容

本發明首先發現了非洲豬瘟病毒D1133L蛋白能夠抑制IFN-β及下游細胞因子ISG-15、ISG-56的mRNA表達，具有免疫抑制作用。其次，為了降低非洲豬瘟病毒的免疫抑制活性，本發明利用IPTG誘導表達系統構建了敲除D1133L基因的ASFV重組病毒。

具體的，本發明提供了非洲豬瘟病毒D1133L蛋白在制備抑制IFN-β及下游抗病毒細胞因子ISG15、SG56表達的藥物中的應用。