[發明專利]一種廣譜中和抗體活性的檢測方法

在審

• 申請號: 202210254500.2
• 申請日: 2022-03-15
• 公開（公告）號: CN114778822A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 趙曉宇;崔雨辰
• 申請（專利權）人: 蘇州復因普肽生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/536
• 分類號: G01N33/536;G01N33/543;G01N33/561;G01N33/58;G01N33/60;G01N33/68;G01N33/80
• 代理公司: 蘇州久元知識產權代理事務所(普通合伙) 32446
• 代理人: 潘宏偉

1.一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1：沉淀反應：通過抗原抗體特異性結合形成可見的免疫復合物，根據沉淀反應陽性判定結果；

步驟2：凝集試驗：通過細菌、紅細胞等顆粒狀抗原與相應抗體結合后形成的凝集現象進行抗體檢測；

步驟3：補體結合試驗：通過利用抗原抗體復合物與補體進行結合，將已知濃度的補體消耗使得濃度減低，從而達到進行抗體檢測的目的；

步驟4：標記免疫測定：包括酶聯免疫法、放射免疫法、熒光免疫法等；

步驟5：免疫印記法：主要檢測蛋白質特性、表達與分布的方法，幫助判斷是否產生病毒特異抗體。

2.根據權利要求1所述的一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：所述步驟2中，出現凝集反應則為陽性。

3.根據權利要求1所述的一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：所述步驟3中，補體測定方法有溶血活性測定、旁路途徑溶血活性測定、C3蛋白含量測定和C3裂解產物測定。

4.根據權利要求1所述的一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：所述步驟3中，補體溶血活性測定，用于測定補體傳統活化途徑Cp的溶血活性。

5.根據權利要求1所述的一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：所述步驟3中，原理是被測血清中補體可使抗體致敏的綿羊紅細胞溶解，溶血程度與補體量呈正相關。補體量以CH50單位/ml表示，正常值170±70單位/ml。

6.根據權利要求1所述的一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：所述步驟3中，旁路途徑溶血活性測定，參與Ap的除C5～C9外，主要有C3、B因子、D因子、C3滅活劑、備解素等6個成分，正常值為21.7±5.4單位/ml。

7.根據權利要求1所述的一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：所述步驟3中，C3蛋白含量測定，C3是補體Cp與Ap兩條活化途徑的交匯點，在整個補體系統中地位十分重要。

8.根據權利要求1所述的一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：所述步驟3中，測定C3含量常用單向免疫擴散法、火箭電泳法或免疫比蝕法，這些方法均需抗C3血清，正常值129±20mg/dl。

9.根據權利要求1所述的一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：所述步驟3中，C3裂解產物測定，補體經Cp或Ap活化時，形成的C3轉化酶可將C3裂解為C3d等活性斷片，即C3Sp。

10.根據權利要求1所述的一種廣譜中和抗體活性的檢測方法，其特征在于：所述步驟3中，雙向免疫電泳法操作較繁瑣，敏感性不高，對流免疫電泳法操作簡便、快速、敏感，僅須抗天然C3血清即可，C3d的正常值為0.8±0.5mg/dl。