[發(fā)明專利]一種食品致敏原檢測(cè)試劑盒及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210249570.9
• 申請(qǐng)日: 2022-03-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115096828A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 傅玲琳;王彥波;李歡;周瑾茹;馮潔斯;李天舒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江工商大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 浙江千克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

1.一種檢測(cè)試劑盒，其特征在于：

所述試劑盒包括：微針貼片、具有高靈敏度的信號(hào)放大功能的試劑A、用于顯色的試劑B、標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液、瓊脂粉和洗液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑A由任意一種具有類過(guò)氧化物酶活性的納米酶溶液，通過(guò)修飾互補(bǔ)核酸序列制成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑B是任意一種在過(guò)氧化物酶或類過(guò)氧化物酶存在的情況下，與過(guò)氧化物發(fā)生反應(yīng)的顯色底物溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的試劑盒，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液是任意一種純度不小于90%的致敏原標(biāo)準(zhǔn)蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的試劑盒，其特征在于：所述洗液是超純水，pH=5.7-8.0的磷酸緩沖液，pH=8.6-10.6的甘氨酸緩沖液中的任意一種或幾種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的微針貼片的制備方法，其特征在于：所述制備包括以下步驟：

通過(guò)在殼聚糖（Cs）的氨基上修飾帶有羧基的適配體（Apt），并與聚乙烯醇溶液（PVA）、交聯(lián)劑混合制成針體制作液；

利用具有微孔結(jié)構(gòu)的高分子模板，將針體制作液倒入模板中，通過(guò)正壓與真空工藝，除去氣泡并使針體制作液完全填充微針針尖腔室；

待其充分干燥，從模具上小心剝離，即可得到所述可特異性快速提取食品中致敏原的微針貼片。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的微針貼片的制備方法，其特征在于：所述（a）步驟中的殼聚糖脫乙酰度不小于95%，粘度在100-200 mPa.s范圍內(nèi)，殼聚糖濃度為1 wt%。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的微針貼片的制備方法，其特征在于：所述（a）步驟中的聚乙烯醇選取醇解度在98-99%(mol/mol)范圍內(nèi)，聚乙烯醇濃度為15-18 wt%；聚乙烯醇和殼聚糖的質(zhì)量比在1:1-9:1范圍內(nèi)。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的微針貼片的制備方法，其特征在于：所述（a）步驟中的交聯(lián)劑是戊二醛，濃度在0.2-0.5 v/v%的范圍內(nèi)。

10.一種權(quán)利要求1所述試劑盒的使用方法，其特征在于：

（a）將負(fù)載適配體的微針貼片扎入食品若干分鐘后從食品表面剝離，用試劑盒中的洗液沖洗微針3次以上；

（b）將上述微針浸泡在試劑盒中的試劑A若干分鐘后取出微針，并用試劑盒中的洗液沖洗3次以上；

（c）將上述微針浸泡在試劑盒中的試劑B，若干分鐘后進(jìn)行吸光值的測(cè)定，并與試劑盒中用標(biāo)準(zhǔn)蛋白制備成含一定濃度蛋白的瓊脂凝膠得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)應(yīng)，計(jì)算得到樣品中的蛋白濃度。