[發明專利]一種檢測水產品中氯唑西林藥物殘留的方法

有效

• 申請號: 202210244135.7
• 申請日: 2022-03-14
• 公開（公告）號: CN114323876B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 熊文明;廖雪義;溫寶瑩;周昱良;陳文浩;李斌;余廉柱;莫婷筠
• 申請（專利權）人: 廣東江門中醫藥職業學院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/38;G01N21/31
• 代理公司: 廣州文智專利代理事務所(特殊普通合伙) 44469
• 代理人: 梁媛

1.一種檢測水產品中氯唑西林藥物殘留的方法，包括以下：

步驟a，稱取3g±0.1g待測均質樣品于離心管中，加入乙腈、去離子水，渦旋提取，加入吸附劑后，混合，進行第一次離心，吸取上層清液分別加入兩個離心管中，吹干，得到兩份提取物，所述吸附劑包括無水硫酸鈉和中性氧化鋁，所述吸附劑中無水硫酸鈉與中性氧化鋁的質量比為1:1；

步驟b，向兩份所述提取物中均加入去離子水和正己烷，振蕩復溶后，進行第二次離心，棄去正己烷層，合并水層，得到第一樣液；

步驟c，向所述第一樣液中加入氫氧化鈉溶液，水浴加熱進行充分反應，反應完全后，得到第二樣液；

步驟d，向所述第二樣液中逐滴加入鹽酸溶液，調節第二樣液的pH值為7±0.2，加入乙酸乙酯進行萃取，棄去乙酸乙酯層，保留水層，得到待測樣液；

步驟e，比濁法測定待測樣液對腐霉菌的生長抑制作用：

取1支裝有改良馬丁培養基的試管，加入去離子水，得到空白混合液；取1支裝有改良馬丁培養基的試管，加入與所述去離子水等體積的待測樣液，得到待測混合液；按照每10ml混合液加入0.1-0.2ml腐霉菌菌液的比例，向所述空白混合液、所述待測混合液中分別加入腐霉菌菌液，混勻后得到空白對照樣品、待測樣品；將所述空白對照樣品、待測樣品在相同培養條件下培養24h，取出在一定波長條件下，分別測定吸光度值，記錄為初始值，繼續培養2h，取出在一定波長條件下，分別第二次測定吸光度值，記錄為生長值，所述一定波長條件為410nm波長，并根據以下公式，計算得到生長率，公式如下：

生長率=（生長值-初始值）/初始值*100%；

步驟f，生長率數值質檢：空白對照樣品的生長率高于90%，空白對照樣品與待測樣品測定的初始值、生長值數據有效，繼續進行后續判定；空白對照樣品的生長率低于90%，空白對照樣品與待測樣品測定的初始值、生長值數據無效，需要對空白對照樣品、待測樣品重復所述步驟e，再次進行培養以及生長值、初始值、生長率測定，直至空白對照樣品的生長率高于90%；

步驟g，結果判定：

所述待測樣品的生長率小于等于50%，則判定所述待測均質樣品中含有氯唑西林，即該水產品中有氯唑西林藥物殘留；所述待測樣品的生長率大于50%，則判定所述待測均質樣品中不含有氯唑西林，即該水產品中沒有氯唑西林藥物殘留。

2.根據權利要求1所述的一種檢測水產品中氯唑西林藥物殘留的方法，其特征在于，所述待測均質樣品為待測魚肉均質樣品、待測蝦肉均質樣品、待測蟹肉均質樣品、待測貝肉均質樣品中的一種。

3.根據權利要求2所述的一種檢測水產品中氯唑西林藥物殘留的方法，其特征在于，所述待測魚肉均質樣品由魚類去鱗后取魚背部油脂較少的部位制備得到，所述待測蝦肉均質樣品由蝦去頭及蝦線、蝦殼后的蝦肉制備得到，所述待測蟹肉均質樣品、所述待測貝肉均質樣品由蟹類、貝類去殼后保留可食用肉類部分制備得到。

4.根據權利要求1所述的一種檢測水產品中氯唑西林藥物殘留的方法，其特征在于，所述步驟a中第一次離心的轉速為10000r/min，所述步驟b中第二次離心的轉速為4000r/min。

5.根據權利要求1所述的一種檢測水產品中氯唑西林藥物殘留的方法，其特征在于，所述步驟c中氫氧化鈉溶液為1mol/L的氫氧化鈉溶液，所述步驟c中水浴加熱的溫度為90℃。

6.根據權利要求1所述的一種檢測水產品中氯唑西林藥物殘留的方法，其特征在于，所述步驟d中鹽酸溶液為1mol/L的鹽酸溶液。

7. 根據權利要求1所述的一種檢測水產品中氯唑西林藥物殘留的方法，其特征在于，所述腐霉菌菌液的制備方法包括以下：用無菌接種環挑取2-3環腐霉菌菌種，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃條件下培養3天，加入3-5ml 0.9%的無菌氯化鈉水溶液洗脫瓊脂斜面培養基，得到洗脫菌液，再將所述洗脫菌液用0.9%的無菌氯化鈉水溶液稀釋制成腐霉菌菌液，所述腐霉菌菌液的cfu值為50-200。