[發明專利]基于雙-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集誘導發光微球的制備方法和應用

在審

• 申請號: 202210243910.7
• 申請日: 2022-03-11
• 公開（公告）號: CN114774107A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 聶麗娟;仲海澄;程泉凱;黃小林;熊勇華;江湖;郭亮;魏夏夏;李響敏
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C09K11/02
• 分類號: C09K11/02;C07D285/14;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 王煥巧

本發明公開了基于雙?(二苯胺基?苯基)?苯并[c]硫代咪唑的聚集誘導發光微球的制備方法和應用，屬于分析檢測領域，聚集誘導發光微球以雙?(二苯胺基?苯基)?苯并[c]硫代咪唑作為AIE分子并通過溶脹法制備，聚集誘導發光微球用于制備定量檢測降鈣素原免疫層析試紙條，免疫層析試紙條結構包括：PVC底板、硝酸纖維素膜、結合墊、樣品墊和吸水墊。聚集誘導發光微球標記的抗降鈣素原標記抗體噴涂在結合墊；硝酸纖維素膜設有檢測區(T線)和控制區(C線)，分別噴涂特異性標記抗體(包被抗體)和抗免疫球蛋白G抗體(二抗)。本發明與傳統FITC熒光試紙條相比，靈敏度提高了14倍，具有操作簡便、快速定量，便于攜帶，樣品用量小等優點。

技術領域

本發明屬于醫學分析檢測技術領域，具體涉及基于雙-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集誘導發光微球及其制備方法和應用。

背景技術

降鈣素原(PCT)是降鈣素(PCT)的前體物，是由116個氨基酸組成的糖蛋白，分子量約為13KD，包括59個氨基酸的N端、32肽的活性CT和21肽的下鈣素。大量的研究資料表明，PCT的含量與感染所致的炎癥反應綜合征、膿毒癥、膿毒性休克等全身感染情況的嚴重程度和預后具有明確的相關性。當嚴重細菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒癥和多臟器功能衰竭時，血漿中PCT的水平會明顯升高。PCT反映了全身炎癥反應的活躍程度，因此常被用于包括：(1)對細菌性炎癥疾病及不明原因發燒的鑒別診斷；(2)對膽源性與細菌感染性胰腺炎的鑒別診斷；(3)對新生兒及兒童的細菌性與病毒性腦膜炎的鑒別診斷；(4)對急性器官排斥反應與移植后感染的鑒別診斷；(5)對伴有急性炎癥性自身免疫疾病是否合并細菌感染的鑒別診斷；(6)對白細胞減少癥患者細菌感染的診斷；(7)大手術后感染的常規診斷和監測；(8)監測多發性損傷病人的感染；(9)對泌尿系統感染的檢測；(10)ICU病人的應用，作為系統性細菌感染及膿毒癥的早期“預警”診斷以及對系統性細菌感染及膿毒癥治療過程的監測及判斷預后等方面的臨床監測。因此，開發一種快速，簡便，廉價的快速檢測方法實時定量檢測PCT對于臨床診斷和后期治療確定方案具有重大意義。

免疫層析技術是一種基于抗原抗體特異性反應的檢測方法，具有檢測速度快、特異性好、操作簡單和費用低等優點，相比于其它方法更能滿足現場大批量檢測的需求，因此近年來發展迅猛，被廣泛應用于醫學檢驗、食品安全和環境污染物監測等領域。傳統免疫層析方法由于探針信號強度弱而致靈敏度不高，無法滿足一些高靈敏的定量檢測需求。熒光探針由于信號強度高，發光穩定，被廣泛應用于體外診斷，生物成像等領域。聚集誘導發光微球是一種新型熒光探針，由于其聚集或固態熒光增強的性能解決了大部分傳統熒光染料濃度淬滅的瓶頸問題，使得這種材料成為了近年來的熱門研究方向。另外，AIE熒光納米粒子也因其高發光、低毒性、組織穿透力強、光穩定性和生物相容性等優點，有望成為熒光標記探針的替代品。

發明內容

針對現有技術中的不足與難題，本發明旨在提供一種基于雙-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集誘導發光微球及其制備方法和應用。

本發明通過以下技術方案予以實現：

本發明一方面提供一種基于雙-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集誘導發光微球的制備方法，包括如下步驟：

(1)以雙-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑分子作為聚集誘導發光材料(AIE)溶解在四氫呋喃溶液中，為A液；

(2)將羧基表面的聚苯乙烯微球分散于十二烷基磺酸鈉水溶液中，為B液；

(3)將A液加入丙酮中混勻，再一邊攪拌一邊加入B液，室溫下磁力攪拌10-20h蒸發丙酮至少量，離心得到產物用超純水洗滌，獲得基于雙-(二苯胺基-苯基)-苯并[c]硫代咪唑的聚集誘導發光微球懸浮分散于超純水中。

進一步地，所述步驟(2)中的聚苯乙烯微球粒徑為250-350nm；所述步驟(1)中AIE的分子結構式為：