[發明專利]識別RNA和具有光動力的熒光探針及其制備方法

在審

• 申請號: 202210243482.8
• 申請日: 2022-03-11
• 公開（公告）號: CN114621248A
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 瞿金清;蔣超;高焱陽
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C07D495/04
• 分類號: C07D495/04;C09K11/06;G01N21/64;A61K41/00;A61P35/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 江裕強

1.識別RNA和具有光動力的熒光探針，其特征在于，其結構通式如式(Ⅰ)：

2.權利要求1所述的識別RNA和具有光動力的熒光探針的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)制備中間體1

將噻吩并[3,2-b]噻吩和N,N-二甲基甲酰胺加入到二氯甲烷或者二氯乙烷中，氮氣保護下，冷卻到-5～5℃，滴加三氯氧磷，升溫回流反應過夜，終止反應，萃取，有機層干燥并濃縮得到粗產物，純化得到淡黃色固體；

將淡黃色固體和N-溴代琥珀酰亞胺加入到N,N-二甲基甲酰胺和乙酸的混合溶液中，氮氣保護下，110～120℃反應過夜，待反應結束后，加水稀釋，萃取，有機層干燥并濃縮得到粗產物，純化得到中間體1；

(2)制備中間體2

將中間體1、(9-苯基-9H-咔唑-2-基)硼酸和碳酸鉀水溶液加入到四氫呋喃或者甲苯中，以四(三苯基膦)鈀為催化劑，氮氣保護下，80～90℃反應過夜，待反應結束后，加入水稀釋，萃取，有機層干燥并濃縮得到粗產物，純化得到中間體2；

(3)制備中間體3

將4-甲基吡啶與碘丙烷加入到二氯甲烷、正己烷或者乙醇中，回流反應過夜，待反應結束后，旋干溶劑，重結晶得到中間體3；

(4)制備熒光探針

將中間體2與中間體3溶于二氯甲烷或者乙醇，以哌啶為催化劑，回流反應過夜，待反應結束后，濃縮，經柱層析法和重結晶得到所述識別RNA和具有光動力的熒光探針。

3.根據權利要求2所述的識別RNA和具有光動力的熒光探針的制備方法，其特征在于，所述的噻吩并[3,2-b]噻吩和N,N-二甲基甲酰胺的摩爾比為1∶10～20；所述的淡黃色固體和N-溴代琥珀酰亞胺的摩爾比為1∶1.2～1.5；所述的中間體1和(9-苯基-9H-咔唑-2-基)硼酸的摩爾比為1∶1.2～1.5；所述的4-甲基吡啶與碘丙烷的摩爾比為1∶3～5；所述的中間體2與中間體3的摩爾比為1∶1.2～1.5。

4.根據權利要求2所述的識別RNA和具有光動力的熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的終止反應通過加入飽和碳酸氫鈉水溶液實現；所述的二氯甲烷或者二氯乙烷的用量為每mmol噻吩并[3,2-b]噻吩加入2～4mL；所述的N,N-二甲基甲酰胺和乙酸的體積比為1～4∶1；所述的N,N-二甲基甲酰胺的用量為每mmol N-溴代琥珀酰亞胺加入2～4mL；所述的乙酸的用量為每mmol N-溴代琥珀酰亞胺加入1～2mL。

5.根據權利要求2所述的識別RNA和具有光動力的熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(1)和步驟(2)中，所述的萃取都是為二氯甲烷萃取；所述的干燥都是經過無水硫酸鈉干燥；所述的純化都是經柱層析法純化；步驟(1)中，所述的加水稀釋是每mmol N-溴代琥珀酰亞胺加入5～10mL水稀釋；步驟(2)中，所述的加水稀釋是每mmol中間體1加入20～50mL水稀釋。

6.根據權利要求5所述的識別RNA和具有光動力的熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(1)中柱層析法分離淡黃色固體時的洗脫液為正己烷與二氯甲烷混合液；正己烷與二氯甲烷的體積比1～5∶1；

柱層析法分離得到中間體1的洗脫液為正己烷與乙酸乙酯的混合液，正己烷與乙酸乙酯的體積比為5～10∶1；

步驟(2)中柱層析法純化時的洗脫液為正己烷與二氯甲烷混合液，正己烷與二氯甲烷的體積比為1～5∶1。

7.根據權利要求2所述的識別RNA和具有光動力的熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的碳酸鉀水溶液的濃度為1～2mol/L，用量為每mmol中間體1加入5～10mL；所述的四氫呋喃或者甲苯的用量為每mmol中間體1加入20～25mL；所述的四(三苯基膦)鈀的用量每mmol中間體1加入25～50mg。

8.根據權利要求2所述的識別RNA和具有光動力的熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，重結晶的溶劑為正己烷或者乙醚；所述的二氯甲烷、正己烷或者乙醇的用量每mmol 4-甲基吡啶加入2～4mL。