[發明專利]一種降解黃曲霉毒素B1

有效

• 申請號: 202210240954.4
• 申請日: 2022-03-10
• 公開（公告）號: CN114605557B
• 公開（公告）日: 2023-07-11
• 發明（設計）人: 鄧詣群;李揚;吳駿;汪玲玲;文繼開;李艷紅;吳婉瑩;陳超
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N9/02;C12N9/18;C12N15/70;C12N1/21;A23L5/20;C12R1/19
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發明公開了一種降解黃曲霉毒素Bsubgt;1/subgt;和/或玉米赤霉烯酮的融合蛋白及其制備方法和應用。構建了一種融合蛋白，所述融合蛋白含有玉米赤霉烯酮降解酶和漆酶，所述玉米赤霉烯酮降解酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，所述漆酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示，玉米赤霉烯酮降解酶位于漆酶的N端，所述玉米赤霉烯酮降解酶和漆酶之間通過氨基酸序列如SEQ?ID?NO:7所示的連接肽連接。所述融合蛋白能在同一環境條件下高效降解黃曲霉毒素Bsubgt;1/subgt;和玉米赤酶烯酮，0.1mg的融合蛋白在50℃條件下，可在8h內，將2μg?ZEN完全代謝，將2μg?AFBsubgt;1/subgt;代謝95.6％。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，涉及一種降解黃曲霉毒素B₁和/或玉米赤霉烯酮的融合蛋白及其制備方法和應用。

背景技術

霉菌毒素污染嚴重的影響到了農業畜牧業的正常發展，造成了大量的經濟損失。其中，黃曲霉毒素B₁、玉米赤酶烯酮和嘔吐毒素三者的污染范圍更是廣泛且深刻。黃曲霉毒素B₁(AFB₁)與玉米赤酶烯酮毒素(ZEN)是谷物飼料中常見的兩種霉菌毒素。AFB₁對哺乳動物危害主要包括中毒性肝炎、肝細胞壞死、免疫抑制和肝癌。AFB₁在人和動物體內被代謝轉化成AFB₁-8，9-環氧化物(AF?BO)，AFBO攻擊DNA堿基鳥嘌呤的N7位點，生成AFB₁-N7-Gua，導致DNA損傷。ZEN是一種由鐮刀菌屬真菌分泌的非甾體雌激素霉菌毒素，危害動物的生殖系統。霉菌毒素不易降解，使得農業畜牧業的從業者在加工生產過程中，蒙受經濟損失與浪費，也給消費者帶來了不小的食品安全風險。

目前已知真菌的降解酶大部分是屬于氧化還原酶類，有漆酶和過氧化物酶等。漆酶屬于多銅氧化酶家族的一員，有著廣泛的底物譜，可氧化多種酚和非酚芳香族化合物，真菌漆酶和細菌漆酶都有著保守的銅離子活性中心。漆酶作為多銅氧化酶家族的一大成員，受到了廣泛的關注，在眾多行業中，漆酶是最有前途的酶制劑之一，它能在空氣中降解底物并產生水，沒有環境污染物產生。與真菌漆酶相比，細菌漆酶在熱穩定性、pH范圍和對堿性條件的耐受性方面都具有顯著優勢。近年來，異源功能表達或定向進化等方法已經用于將細菌漆酶轉化為高增值的生物催化劑，漆酶可用于染料脫色、有毒污染物的降解、食品工業、生物傳感器、造紙和紙槳生產和有機化合物合成等方面，在工業中表現出巨大的經濟價值。

玉米赤霉烯酮降解酶是一種已知的玉米赤霉烯酮內酯水解酶，該酶能夠打開玉米赤霉烯酮分子中的內酯環，使得開環后的玉米赤霉烯酮不再能與雌激素受體結合，從而起到毒素降解的作用。

漆酶降解黃曲霉毒素B₁和玉米赤霉烯酮降解酶降解玉米赤霉烯酮，各有其最適的反應條件，但兩種酶無法在同一環境條件下發揮優越的降解霉菌毒素的效果，降解效率低下，適用范圍窄，不利于工業生產使用。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的上述不足，提供一種降解黃曲霉毒素B₁和/或玉米赤霉烯酮的融合蛋白及其制備方法和應用。

本發明的第一個目的是提供一種融合蛋白。

本發明的第二個目的是提供一種編碼基因。

本發明的第三個目的是提供一種重組質粒。

本發明的第四個目的是提供一種重組菌株。

本發明的第五個目的是提供所述融合蛋白、所述編碼基因、所述重組質粒和、或所述重組菌株在降解黃曲霉毒素B₁和/或玉米赤霉烯酮毒素中的應用。

本發明的第六個目的是提供所述融合蛋白的制備方法。

本發明的第七個目的是提供一種降解黃曲霉毒素B₁和/或玉米赤霉烯酮毒素的方法。