[發明專利]一種鑒定川貝母的LAMP引物組、試劑盒及其檢測方法與用途

在審

• 申請號: 202210238606.3
• 申請日: 2022-03-11
• 公開（公告）號: CN114480719A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 徐曉可;黃啟紅;鄧華明;余至興;黃逸儀;徐紫薇
• 申請（專利權）人: 廣東嶺南職業技術學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 廣州潤禾知識產權代理事務所(普通合伙) 44446
• 代理人: 鄭永泉

本發明公開了一種用于川貝母產品鑒定的LAMP引物組、試劑盒及其檢測方法與用途，采用LAMP引物組完成川貝母的鑒定，能夠通過LAMP引物組特異性擴增待鑒定川貝母樣品，通過反應體系的顯色反應觀察擴增結果，實現對川貝母正偽品的鑒別，本發明建立的LAMP技術應用于市售川貝母樣品快速篩查檢測，結果與中國藥典PCR?RFLP方法結果一致，簡便快捷，具有較好的推廣應用前景。

技術領域

本發明涉及中藥檢測領域，更具體地，涉及一種鑒定川貝母的LAMP引物組、試劑盒及其檢測方法與用途。

背景技術

川貝母為百合科，貝母屬多年生草本植物，是藥材“川貝”的主要來源之一，是潤肺止咳的名貴中藥材，應用歷史悠久，馳名中外。川貝母性微寒、味甘苦,能清熱潤肺,化痰止咳?？捎糜谥委熢锾悼人曰驘崽悼人?痰稠不易咯不岀者，也可用于肺虛久咳，或陰虛不足，干咳無痰或痰少咽燥，咯痰帶血者，有較高的藥用價值。由于川貝母的市場供應存在野生資源緊張匱乏、人工繁育效率低下、生長周期較長等問題，使得川貝母成品的市場價格也較高，故在中藥市場上，普遍存在著以浙貝母、平貝母、伊貝母、湖北貝母等偽品混充川貝母的現象，川貝母的鑒定顯得意義重大。

傳統的川貝母鑒別方法有性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒別等方法，這些鑒別方法容易受到藥材生長環境、生長年限以及產地加工等諸多影響，在川貝母鑒別上存在一定的局限性。例如，研究發現栽培的川貝母和暗紫貝母不含貝母素乙，而中國藥典規定：川貝母在薄層鑒別反應中，應出現貝母素乙斑點。這就會出現薄層鑒別法將栽培的川貝母和暗紫貝母鑒定為偽品的情況。

中國藥典規定川貝母的鑒別包括了性狀鑒別和PCR-RFLP法，傳統的性狀鑒別方法需要豐富的經驗積累，PCR-RFLP鑒別步驟繁雜、耗時長，且需要大型儀器。因此，建立快速、特異、便捷的川貝母鑒別方法，對中藥材市場的監管及中醫中藥的健康發展具有重要的現實意義。

發明內容

本發明旨在克服上述現有技術的至少一種缺陷(不足)，提供一種鑒定川貝母產品的LAMP引物組、試劑盒及其檢測方法與用途，通過特異性鑒定川貝母的LAMP引物組及其反應體系，能夠實現高特異性、快速、靈敏的川貝母鑒定，且操作簡單，便于廣泛應用。

本發明的首要目的在于克服傳統PCR-RFLP擴增耗時長、加熱程序復雜的問題，提供一種鑒定川貝母的引物組，該引物組應用于LAMP擴增和相應的LAMP反應體系中。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種鑒定川貝母的引物組，包括外引物F3、外引物B3、內引物FIP、內引物BIP；序列分別為：F3：5’-CGGATGACACCGTGTCGG-3’；B3：5’-CGAGATATCCGTTGCCGAG-3’；FIP：5’-CCGCAAATCGTGCCCGGAGCACTATGCCCGCCCTACC-3’；BIP：5’-CGGCCTGCGCCAAGGAACAGGATAGAGAGCGAACGCCG-3’。

在本發明的一個實施例中，該引物是基于已鑒定的川貝母保守序列設計和改進而產生的，該引物組能特異性擴增相應的川貝母產品DNA，結合顯色反應，能夠快速鑒定貝母樣品是否為川貝母。

本發明的再一目的在于提供一種鑒定川貝母的試劑盒，含有所述的引物組。

優選地，含有所述的引物組，通過25μL的LAMP反應體系檢測，LAMP反應體系包括：

本發明的再一目的在于提供一種鑒定川貝母的LAMP檢測方法，包括步驟：

A1、提取鑒別待鑒定樣品DNA；

A2、設計擴增川貝母DNA的LAMP引物；

A3、基于A1獲取的待鑒定樣品DNA、A2獲取的LAMP引物配置相應的LAMP反應體系；