[發(fā)明專利]一種白檀組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210235518.8
• 申請(qǐng)日: 2022-03-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114731950B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-01-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 咸洋;韓彪;解孝滿;徐慧;張繼良;趙立軍;喬婕;董昕;王磊;崔程程
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省林草種質(zhì)資源中心（山東省藥鄉(xiāng)林場(chǎng)）
• 主分類號(hào): C12N5/04
• 分類號(hào): C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 北京弘權(quán)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11363
• 代理人: 逯長(zhǎng)明;許偉群

本發(fā)明提供了一種白檀組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，由MS培養(yǎng)基、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、硝酸鈣、蔗糖和瓊脂組成。其中通過(guò)添加硝酸鈣，提高M(jìn)S培養(yǎng)基中的鈣元素的濃度；通過(guò)減少乙二胺四乙酸二鈉和硫酸亞鐵的含量，降低鐵元素的濃度，以更好地適用于白檀組織培養(yǎng)。其中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑包括6?芐氨基嘌呤和激動(dòng)素。本發(fā)明還提供了一種白檀的組織培養(yǎng)方法，通過(guò)白檀種子的消毒、種子的萌發(fā)培養(yǎng)、無(wú)菌組培苗的獲取、組培苗繼代培養(yǎng)獲得白檀的幼苗，其中種子的萌發(fā)培養(yǎng)和組培苗繼代培養(yǎng)兩個(gè)環(huán)節(jié)，利用了上述白檀組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，能改善白檀的組織培養(yǎng)的效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種白檀組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

白檀屬山礬科山礬屬落葉灌木或小喬木，生長(zhǎng)在海拔760-2500米的山坡、路邊、疏林或密林中。白檀的葉可入藥；白檀油在機(jī)械行業(yè)中用作潤(rùn)滑油，在紡織行業(yè)中用來(lái)軟化羊毛和清除靜電，在油墨工業(yè)中用作調(diào)和劑；白檀木是優(yōu)質(zhì)木材可作為家具用材；也是優(yōu)良的水土保持樹(shù)種之一。白檀應(yīng)用廣泛，開(kāi)發(fā)前景廣闊，但是白檀的種子具有休眠的特性，白檀的人工播種復(fù)雜且發(fā)芽率不高。在強(qiáng)烈人工或自然變溫條件下，能使白檀當(dāng)年播種出苗率達(dá)到44％左右，有些可能需要待第2年方可萌發(fā)；且種子繁殖不易保持母體的優(yōu)良性狀。單一、低效的繁殖方式是阻礙白檀研究工作和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。

組織培養(yǎng)是一種高效的無(wú)性繁殖方法，既可以提高繁殖效率，又可以保留母株的優(yōu)良性狀，在種苗快繁、良種選育等方面發(fā)揮重要作用。開(kāi)發(fā)白檀組織培養(yǎng)技術(shù)是解決白檀繁殖問(wèn)題的快捷、有效途徑，可在白檀種苗快繁、良種選育、種苗快繁等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

白檀的組織培養(yǎng)中使用MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，根據(jù)白檀生長(zhǎng)特性對(duì)鈣、鐵離子含量進(jìn)行了調(diào)整，調(diào)整后的培養(yǎng)基更適合白檀組培苗的生長(zhǎng)。白檀的組織培養(yǎng)效果主要從種子的萌發(fā)率、組培苗的平均出芽率、生長(zhǎng)高度以及分化率四方面來(lái)評(píng)價(jià)。未經(jīng)改良的MS培養(yǎng)基和濃度不適合的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑應(yīng)用在白檀的組織培養(yǎng)中，會(huì)造成白檀的組織培養(yǎng)效果不佳。

發(fā)明內(nèi)容

本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N白檀組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其組織培養(yǎng)方法，來(lái)解決白檀的組織培養(yǎng)效果不佳的問(wèn)題。

為解決白檀的組織培養(yǎng)效果不佳的問(wèn)題，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N用于白檀組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，由改良的MS培養(yǎng)基、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、硝酸鈣、蔗糖和瓊脂組成。

所述改良MS培養(yǎng)基各組分的含量為；

硝酸鉀1900mg/L；硝酸銨1650mg/L；磷酸二氫鉀170mg/L；七水硫酸鎂370mg/L；二水氯化鈣440mg/L；碘化鉀0.83mg/L；硼酸6.2mg/L；四水硫酸錳22.3mg/L；硫酸鋅 8.6mg/L；鉬酸鈉0.25mg/L；硫酸銅0.025mg/L；氯化鈷0.025mg/L；乙二胺四乙酸二鈉 26.11mg/L；硫酸亞鐵19.46mg/L；肌醇100mg/L；甘氨酸2mg/L；鹽酸硫胺素0.1mg/L；鹽酸吡哆醇0.5mg/L；煙酸0.5mg/L。

本申請(qǐng)通過(guò)將硫酸亞鐵濃度降至19.46mg/L、乙二胺四乙酸二鈉濃度降至26.11mg/L，改變了MS培養(yǎng)基中鐵的含量，避免因鐵元素含量過(guò)高，影響白檀的萌發(fā)、分化、生長(zhǎng)。

可選的，所述蔗糖含量為30g/L，可以作為培養(yǎng)基的碳源，為植物的生長(zhǎng)提供能量，同時(shí)還可以作為培養(yǎng)基的滲透調(diào)節(jié)劑；所述瓊脂的含量為6g/L，作為培養(yǎng)基的凝固劑，將液體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)化為固體培養(yǎng)基。

可選的，所述培養(yǎng)基pH值調(diào)整為5.8-6.0，更適合白檀種子的萌發(fā)和白檀組培苗的生長(zhǎng)。

可選的，所述植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑包括6-芐氨基嘌呤(6-BA)和激動(dòng)素(KT)。所述6- 芐氨基嘌呤濃度為1.1-1.3mg/L，所述激動(dòng)素的濃度為0.1mg/L。6-芐氨基嘌呤可以促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)，促進(jìn)白檀芽的形成。激動(dòng)素是細(xì)胞分裂素的一種，可誘導(dǎo)離體組織細(xì)胞的分裂和調(diào)節(jié)分化，促進(jìn)白檀組培苗的生長(zhǎng)、分化。