[發明專利]一種用于早產兒小腸結腸炎中糞便菌群的培養基及應用

有效

• 申請號: 202210231410.1
• 申請日: 2022-03-10
• 公開（公告）號: CN114540237B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 王玉迎;詹曉北;王佳偉;李志濤;高敏杰;蔣蕓;張倚菲;余丹;朱凌
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 趙巧娜

1.一種培養早產兒小腸結腸炎糞便菌群的培養基，其特征在于，每1L培養基中包括以下含量的各組分：動物組織胃蛋白酶消化物的添加量為9~11?g，酵母提取物的添加量為2~4g，甘油的添加量為9~11?mL，磷酸氫二鉀的添加量為3~6?g，甘露醇的添加量為8~12?g，氯化鈉的添加量為4~6?g，乳糖的添加量為13~17?g，酚紅的添加量為0.03~0.05?g，亮綠的添加量為0.004~0.006?g，肉提取物的添加量為8~12?g，蛋白胨的添加量為8~12?g；所述肉提取物的制備方法為：羊腿肉、沙丁魚肉和脫殼磷蝦經切割和漿化，在60℃下加入堿性蛋白酶，保持連續攪動2?h，隨后溫度升高到100℃以上高壓蒸煮45?min，離心后去除上層油脂及沉淀肉糜，取中層液體真空冷凍干燥制成粉末。

2.如權利要求1所述的培養基，其特征在于，每1L培養基中包括以下含量的各組分：動物組織胃蛋白酶消化物的添加量為10?g，酵母提取物的添加量為3?g，甘油的添加量為10mL，磷酸氫二鉀的添加量為5?g，甘露醇的添加量為10?g，氯化鈉的添加量為5?g，乳糖的添加量為15?g，酚紅的添加量為0.04?g，亮綠的添加量為0.005?g，肉提取物的添加量為10?g，蛋白胨的添加量為10?g。

3.如權利要求2所述的培養基，其特征在于，所述培養基為固體培養基時，瓊脂粉的添加量為1~1.4?%。

4.如權利要求3所述的培養基，其特征在于，所述培養基中還含有抗生素。

5.如權利要求4所述的培養基，其特征在于，所述抗生素為：8~12?mM慶大霉素、48~52mM氨芐青霉素。

6.如權利要求5所述的培養基，其特征在于，所述抗生素為：10?mM慶大霉素、50?mM氨芐青霉素。

7.一種培養早產兒小腸結腸炎糞便菌群的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

（1）制備糞便懸浮液；

（2）將步驟（1）得到的糞便懸浮液添加至裝有權利要求1~6任一所述的培養基的培養瓶中，在厭氧條件下培養制備得到培養物；

（3）將步驟（2）得到的培養物注入含有權利要求1~6任一所述的培養基的大腸生物反應器中培養。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟（3）為，將50?mL培養物注入裝有150?mL早產兒小腸結腸炎糞便菌群培養基的大腸生物反應器中，保持大腸生物反應器無蠕動。

9.如權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟（3）為，將50?mL培養物注入裝有150?mL早產兒小腸結腸炎糞便菌群培養基的大腸生物反應器中，蠕動頻率設置為4次/min，pH控制為6.5。