[發明專利]一種固定化β-半乳糖苷酶的制備方法及固定化酶在制備低聚半乳糖中的應用

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• 申請號: 202210231317.0
• 申請日: 2022-03-09
• 公開（公告）號: CN114438058A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 楊貞耐;賴田甜;張敏;姚夢柯;趙華
• 申請（專利權）人: 北京工商大學
• 主分類號: C12N9/38
• 分類號: C12N9/38;C12N11/10;C12P19/00;A23C9/12;A23C9/123
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

1.一種β-半乳糖苷酶的固定化酶的制備方法，依次包括如下步驟：

(1)將殼聚糖膠體溶液逐滴滴入到NaOH水溶液中，靜置反應，形成殼聚糖微球，用水洗滌殼聚糖微球至中性，收集殼聚糖微球；

(2)將步驟(1)得到的殼聚糖微球置于戊二醛水溶液中，靜置反應，然后用水洗滌殼聚糖微球以去除殘留的戊二醛，收集殼聚糖微球；

(3)將步驟(2)得到的殼聚糖微球置于β-半乳糖苷酶溶液中，振蕩反應，然后用磷酸鹽緩沖液洗滌殼聚糖微球以除去未結合的β-半乳糖苷酶，收集殼聚糖微球，即為β-半乳糖苷酶的固定化酶。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中，靜置反應的時間為2小時。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，靜置反應的時間為3小時；所述步驟(2)中，戊二醛水溶液中的戊二醛濃度為2％。

4.如權利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，振蕩反應的時間為12小時；所述步驟(3)中，β-半乳糖苷酶溶液提供的β-半乳糖苷酶和殼聚糖微球的用量配比為0.4mgβ-半乳糖苷酶：1g殼聚糖微球。

5.一種β-半乳糖苷酶的固定化酶的制備方法，依次包括如下步驟：

(1)將殼聚糖膠體在堿性液相環境中形成殼聚糖微球；

(2)通過戊二醛活化將殼聚糖微球表面的氨基轉化為醛基；

(3)殼聚糖微球表面的醛基與β-半乳糖苷酶上的氨基發生schiff堿反應，從而β-半乳糖苷酶固定在殼聚糖微球表面，得到β-半乳糖苷酶的固定化酶。

6.權利要求1至5中任一所述方法制備得到的β-半乳糖苷酶的固定化酶。

7.權利要求6所述β-半乳糖苷酶的固定化酶的應用，為如下(a)或(b)：

(a)在制備低聚半乳糖中的應用；

(b)在制備富含低聚半乳糖的產品中的應用。

8.一種制備低聚半乳糖的方法，包括如下步驟：采用權利要求6所述β-半乳糖苷酶的固定化酶將乳糖轉化為低聚半乳糖。

9.一種制備低聚半乳糖的方法，包括如下步驟：

采用權利要求1至5中任一所述方法制備β-半乳糖苷酶的固定化酶；

采用所述β-半乳糖苷酶的固定化酶將乳糖轉化為低聚半乳糖。

10.一種制備發酵乳的方法，包括如下步驟：

采用權利要求1至5中任一所述方法制備β-半乳糖苷酶的固定化酶；

在乳糖溶液中加入所述β-半乳糖苷酶的固定化酶，進行反應，然后冷凍干燥，得到產物；

以牛奶為原料，加入所述產物和植物乳桿菌，制備得到發酵乳。