[發明專利]一種白頜大樹蛙防御肽Zs-CATH及其基因和應用

有效

• 申請號: 202210228015.8
• 申請日: 2022-03-08
• 公開（公告）號: CN114671936B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 沈艷;武靜;楊海龍;木麗仙;米鍇;邊慧;劉彤;呂靖
• 申請（專利權）人: 昆明醫科大學
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C12N15/12;A61K38/17;A61P31/04;A61P31/10;A01N47/44;A01P1/00;A01P3/00
• 代理公司: 北京奧肯律師事務所 11881
• 代理人: 張奔

本發明屬于多肽應用技術領域，具體提供了白頜大樹蛙防御肽Zs?CATH及其基因和應用，該防御肽Zs?CATH是中國兩棲類白頜大樹蛙防御肽基因編碼的一種環狀多肽，分子量3602.47道爾頓，等電點10.49，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。編碼防御肽Zs?CATH前體的基因由628個核苷酸組成，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，其中第352–450位核苷酸為成熟白頜大樹蛙防御肽Zs?CATH的編碼基因。白頜大樹蛙防御肽Zs?CATH具有廣譜抗微生物性，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和糞產堿菌引起的感染疾病具有顯著的抑制細菌和真菌生長的作用，可作抗菌劑和醫療器械涂布藥物。

技術領域

本發明屬于多肽應用技術領域，具體涉及一種白頜大樹蛙防御肽Zs-CATH及其基因和應用。

背景技術

近年來的研究表明，抗菌肽是所有動物、植物和微生物防御系統中的一個重要組成部分。它們是機體為抵御病原微生物侵襲而產生的一類小分子活性多肽，具有分子量小、穩定性好、殺菌迅速和不易產生耐藥性等特點。這些特性使得抗菌肽具有非常廣闊的運用前景，有望替代目前臨床上易于產生耐藥性的傳統抗生素藥物。抗菌肽不易產生耐藥性的原因是，其殺菌機理與傳統抗生素不同。它們主要是作用于細菌的細胞膜,破壞其穩定性，進而細胞膜滲透性發生改變，使得內容物外泄導致細胞死亡。不同物種來源或同一物種中抗菌肽的結構形式和生物活性差別較大。國內外研究人員一直致力于從不同物種中發掘結構新穎的抗菌肽，直接利用或者以其為模板進行分子改造。目前，已有抗菌肽用于海產品保鮮和動物飼料添加劑中。結合生態環境從各種自然資源中發掘具有潛在藥用價值的抗菌肽是目前多肽新藥研究的一個熱點。

兩棲動物是抗菌肽資源發掘中最重要的一類資源，其皮膚裸露，為抵御環境中各種微生物的侵襲，它們能夠分泌多種分子結構新穎、功能復雜多樣的的抗菌肽。這些活性多肽廣泛參與機體的各種生理活動，具有各種藥理活性，如抗微生物、抗腫瘤、抗氧化、免疫調節、創傷修復、鎮痛等作用。樹蛙與其它的兩棲動物明顯不同的地方就是，它們的大部分時間都是在樹上度過，而其它的兩棲動物大部分時間都在水里或陸地上。這種特異的樹棲生活使得它們面臨的天敵以及外界微生物都與其他的兩棲動物有所差異，經過適應性進化，必然擁有一套具有自身優勢的先天免疫防御系統。

據國內外文獻報道，已從各種生物來源分離得到不同的活性多肽，而且有些已進入臨床階段。雖然我國對兩棲動物應用有著悠久的歷史，但是都是整體入藥，對其活性成分和藥理性質的研究比較薄弱。白頜大樹蛙主要分布于云南、西藏等地，是我國特色資源動物之一，但其皮膚分泌物中cathelicidin家族的抗菌肽少有報道。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術中樹蛙分泌的多肽研究薄弱的問題。

為此，本發明提供了一種白頜大樹蛙防御肽Zs-CATH，該防御肽Zs-CATH是中國兩棲類白頜大樹蛙防御肽基因編碼的一種環狀多肽，分子量3602.47道爾頓，等電點10.49，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1(ASKKGKCNFMCKVKQKLRAIGSKTVIGTVVHKI)所示。

SEQ?ID?NO.1：

其第七位半胱氨酸和第十一位半胱氨酸組成一對分子內二硫鍵。

該白頜大樹蛙防御肽前體的編碼基因由628個核苷酸(SEQ?ID?NO:2)組成，其自5’端至3’端序列如SEQ?ID?NO.2所示。

SEQ?ID?NO.2：

其中，第352–450位核苷酸為成熟白頜大樹蛙防御肽Zs-CATH的編碼基因。

本發明提供的這種白頜大樹蛙防御肽Zs-CATH可用于制備廣譜抗微生物(包括革蘭氏陰性細菌和革蘭氏陽性細菌)試劑，還對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和糞產堿菌引起的感染疾病具有顯著的治療的作用。