[發(fā)明專利]一種毛囊干細(xì)胞外泌體的分離方法及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210224004.2
• 申請(qǐng)日: 2022-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN114540293A
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔國(guó)新;徐璟;席桂榮;田金鑫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海禺澤生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775;A61K35/28;A61P17/14
• 代理公司: 成都魚爪智云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51308
• 代理人: 楊洪婷

本發(fā)明提出一種毛囊干細(xì)胞外泌體的分離方法及應(yīng)用，涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。該方法以聚乳酸和聚乙烯醇作為聚合原料進(jìn)行聚合制得多孔微球，將其填充在尺寸排阻柱中，不僅能夠有效降低外泌體的黏附作用，避免堵塞的情況的產(chǎn)生，還可有效縮短分離時(shí)間，提升分離效率；通過(guò)海藻酸鈉使得微球內(nèi)部及表面形成致密且均勻的多孔結(jié)構(gòu)，能夠有效提升分離效果，從而提升外泌體的純度和濃度，達(dá)到預(yù)期效果；多孔微球的制備方法簡(jiǎn)單便捷，易達(dá)到批量化工業(yè)生產(chǎn)的效果，實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)利益最大化。由毛囊干細(xì)胞分離獲得的外泌體試用具有較好的防治脫發(fā)效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種毛囊干細(xì)胞外泌體的分離方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

外泌體是由細(xì)胞分泌的一類細(xì)胞外囊泡，其粒徑約30nm-200nm，通常攜帶蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)等生物活性分子，可將這些生物活性分子融入靶細(xì)胞而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞交互，因此，在細(xì)胞信號(hào)傳遞中起重要作用。由于外泌體具有上述特性，現(xiàn)已被應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域。

通常，外泌體的分離方式主要包括超速離心法、聚合物沉淀法、尺寸排阻法、免疫親和法、膜親和方法等。其中尺寸排阻法主要有超濾和尺寸排阻柱兩種。超濾是最常見的利用尺寸排阻原理提取外泌體的方法，相比于超速離心，超濾耗時(shí)短且不需要特別的儀器設(shè)備。超濾提取樣本中的外泌體依據(jù)的原理是將小于濾膜孔徑的雜質(zhì)顆粒與外泌體分離。已有文獻(xiàn)利用超濾結(jié)合短時(shí)間的離心快速富集了尿液中的外泌體，該方法提取外泌體的效率和超離相當(dāng)。

尺寸排阻法是尺寸排阻柱里面填充著一定分子孔徑的多孔凝膠，當(dāng)樣本進(jìn)入凝膠柱時(shí)，大粒徑的顆粒率先流出，小于凝膠孔徑的顆粒由于受到排阻隨后流出，因此達(dá)到不同粒徑顆粒的分離效果。但是該方法容易受到與外泌體同等大小的雜質(zhì)的干擾，從而使得分離而得外泌體純度較低，分離效果較差。

基于此，提出一種提升外泌體分離純度的方法具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種毛囊干細(xì)胞外泌體的分離方法，其能夠?qū)⒎蛛x純化由毛囊干細(xì)胞獲得的外泌體，有效提升其純度，使用價(jià)值更高。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種毛囊干細(xì)胞外泌體的應(yīng)用，其可激發(fā)毛囊活性，促進(jìn)生發(fā)，達(dá)到防治脫發(fā)的效果。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題是采用以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

一方面，本發(fā)明提出一種毛囊干細(xì)胞外泌體的分離方法，主要包括以下步驟：

收集P5-P6毛囊干細(xì)胞的培養(yǎng)液，制得待分離品；再將待分離品與流動(dòng)相混合，經(jīng)過(guò)尺寸排阻柱進(jìn)行分離，制得外泌體；尺寸排阻柱中填充有多孔微球，且多孔微球的制備方法如下：

將溶解后的聚乳酸與1w/v％-3w/v％的聚乙烯醇混合，經(jīng)24h-36h的攪拌后，制得混合液一；再將混合液一與海藻酸鈉混合，5h-7h后，制得混合液二；將混合液二滴入氯化鈣溶液中，制得微球；將微球在堿液中浸泡20min-30min，制得多孔微球。

另一方面，本發(fā)明提出一種毛囊干細(xì)胞外泌體的應(yīng)用，將上述分離方法分離而得的外泌體應(yīng)用于防治脫發(fā)。

本發(fā)明實(shí)施例的毛囊細(xì)胞外泌體的分離方法及應(yīng)用至少具有以下有益效果：

一、以聚乳酸和聚乙烯醇作為聚合原料進(jìn)行聚合制得多孔微球，將其填充在尺寸排阻柱中，不僅能夠有效降低外泌體的黏附作用，避免堵塞的情況的產(chǎn)生，還可有效縮短分離時(shí)間，提升分離效率；

二、通過(guò)海藻酸鈉使得微球內(nèi)部及表面形成致密且均勻的多孔結(jié)構(gòu)，能夠有效提升分離效果，從而提升外泌體的純度和濃度，達(dá)到預(yù)期效果；

三、多孔微球的制備方法簡(jiǎn)單便捷，易達(dá)到批量化工業(yè)生產(chǎn)的效果，實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)利益最大化。

四、由毛囊干細(xì)胞分離獲得的外泌體試用具有較好的防治脫發(fā)效果。

具體實(shí)施方式