[發明專利]一種磁珠法病原體核酸提取試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 202210215944.5
• 申請日: 2022-03-07
• 公開（公告）號: CN114457069A
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 傅明華;李美瓊;夏姝瑞;聶晶
• 申請（專利權）人: 江蘇迅睿生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京棘龍知識產權代理有限公司 11740
• 代理人: 張開

1.一種磁珠法病原體核酸提取試劑盒，其特征在于，包括裂解液、蛋白酶K、磁珠液、洗滌液A、洗滌液B及洗脫液；

所述解液包含：高離序鹽，去污劑，ph5.0-8.0的緩沖液；

其中所述高離序鹽濃度為1.2-5M，選自異硫氰酸胍、鹽酸胍或高氯酸鋰中的一種或多種；

所述去污劑占裂解液總體積的5%-20%，選自Triton x-100、吐溫-20、NP-40或SDS中的一種或多種；

ph5.0-8.0緩沖液濃度為0.05M-0.2M，選自三羥甲基氨基甲烷、乙酸鈉或檸檬酸鈉中的一種；

還包括5mm-50mmEDTA。

2.根據權利要求1所述的磁珠法病原體核酸提取試劑盒的洗滌液A，其特在于包含：高濃度無機鹽，醇類；

其中所述高濃度無機鹽濃度為2M-4.2M，選自氯化鈉、碘化鉀或氯化鉀中的一種或多種；所述醇類選自乙醇和異丙醇中的一種或多種。

3.根據權利要求1所述的磁珠法病原體核酸提取試劑盒的洗滌液B，其特在于包含60-80%醇類。

4.根據權利要求1所述的磁珠法病原體核酸提取試劑盒的洗脫液，其特在于包含0.1%焦碳酸二乙酯。

5.根據權利要求1所述的磁珠法病原體核酸提取試劑盒的蛋白酶K、磁珠液，均為外購產品；

所述蛋白酶K濃度為10-50mg/mL；所述磁珠液濃度為25-50mg/mL。

6.根據權利要求1-6任意項所述的磁珠法病原體核酸提取試劑盒的使用方法，其特征在于，提取方法具體步驟如下：

在生物樣本中加入裂解液與蛋白酶K，40-70℃裂解1min，加入磁珠液混勻1-10min；

將步驟1）的離心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附完全后，使用無菌吸頭棄掉上清液，并加入0.5-1mL的洗滌液A，混勻后將離心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附完全后，使用無菌吸頭棄掉上清液；

向步驟2）離心管內加入0.5-1mL的洗滌液B，混勻后將離心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附完全后，使用無菌吸頭棄掉上清液（此步驟重復1次）

將磁珠置于空氣中干燥5-10min，待磁珠表面無殘留液體后，加入50-100洗脫液,55-85℃溫育5-10min（中途每2-3min混勻一次），后將離心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附完全后，將核酸液轉移至新的離心管中備用。

7.根據權利要求1所述一種磁珠法病原體核酸提取試劑盒，其特征在于，還包括：試劑盒、試劑密封蓋以及密封結構；

所述密封結構包含：上密封凸環、下密封凸環、上密封膠墊、下密封膠墊、嚙合環、嚙合環槽；

所述嚙合環槽設置于試劑盒中心開口部位，嚙合環位于試劑密封蓋上，所述上密封凸環、下密封凸環分別設置于試劑密封蓋與試劑盒的端面開口上，所述試劑盒、試劑密封蓋分別開設有環形密封槽，所述嚙合環與嚙合環槽之間通過螺紋嚙合，所述上密封膠墊、下密封膠墊分別位于試劑盒端面開口與試劑密封蓋上。

8.根據權利要求7所述一種磁珠法病原體核酸提取試劑盒，其特征在于，所述上密封膠墊、下密封膠墊均具有與環形密封槽匹配的環形開口。