[發(fā)明專利]一種非洲豬瘟病毒基因工程亞單位口服疫苗

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210208640.6
• 申請日: 2022-03-04
• 公開（公告）號: CN114456240B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔡秀磊;趙賽賽;張洪亮;單虎;秦志華;張皓杰
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K14/01
• 分類號: C07K14/01;C12N15/34;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/74;C12N1/21;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/01
• 代理公司: 北京識然知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11975
• 代理人: 曾慶國

本發(fā)明提供一種非洲豬瘟病毒基因工程亞單位口服疫苗，其中包含有用于重組表達非洲豬瘟病毒抗原蛋白的基因工程乳酸乳球菌，所述的抗原蛋白是氨基酸序列為SEQ?ID?NO:1的ASFV?p30蛋白、氨基酸序列為SEQID?NO:3的ASFV?p54蛋白或氨基酸序列為SEQ?ID?NO:5的ASFV?p72蛋白。所述的抗原蛋白連接有大腸埃希氏菌不耐熱腸毒素B亞單位LTB基因蛋白。本發(fā)明的非洲豬瘟病毒基因工程亞單位口服疫苗可有效地刺激腸道局部免疫細胞產(chǎn)生分泌型IgA，刺激機體產(chǎn)生黏膜反應(yīng)，通過血液循環(huán)，進而刺激機體產(chǎn)生細胞免疫和體液免疫。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于疫苗制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種非洲豬瘟病毒基因工程亞單位口服疫苗。

背景技術(shù)

非洲豬瘟(African?swine?fever，ASF)是由非洲豬瘟病毒(African?swine?fevervirus，ASFV)引起的一種急性、熱性、高度接觸性、致死性動物傳染病。ASFV是非洲豬瘟病毒科(Asfarviridae)非洲豬瘟病毒屬(Asfivirus)的唯一成員，是目前已知的唯一具有DNA基因組的蟲媒病毒。發(fā)病豬主要表現(xiàn)為體溫升高、皮膚黏膜廣泛性出血、妊娠母豬流產(chǎn)等。非洲豬瘟致死率高達100％，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴重危害。

ASF與其他動物疫病不同，自1921年首次爆發(fā)至今已有100余年。當(dāng)下，對非洲豬瘟的預(yù)防措施主要是強化監(jiān)管力度、加強消毒滅源及做好生物安全防護措施，一旦暴發(fā)只能全群撲殺以期徹底根除，對養(yǎng)豬業(yè)而言損失極大。目前市場上仍然缺乏有效的疫苗，其中滅活疫苗不能抵御ASF強毒株的攻擊，不能提供有效的免疫保護力，故而不能作為今后研究的重點方向；而減毒活疫苗仍存在生物安全方面存在隱患，疫苗接種后的安全性、有效性等有待進一步評估。

而基因工程疫苗，成本低、在安全性、鑒別診斷等方面優(yōu)勢明顯，研究更多的ASFV保護性抗原或免疫佐劑，刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答效力是當(dāng)前研制ASFV亞單位疫苗的關(guān)鍵，因而ASFV亞單位疫苗研究潛力較大。目前對于非洲豬瘟的活載體疫苗的研究仍在探索中，而載體及保護性抗原的選擇和設(shè)定以及佐劑的優(yōu)化是研究的重點方向；

口服黏膜免疫不僅在黏膜組織產(chǎn)生免疫應(yīng)答，還可以引起全身體液免疫應(yīng)答，使用簡便安全，是目前疫苗研發(fā)的重要方向。而消化道中復(fù)雜的微環(huán)境是影響口服黏膜免疫的關(guān)鍵因素，利用乳酸乳球菌表達系統(tǒng)研制的口服疫苗，具有易通過黏膜吸收、無副作用的特點，通過胃腸黏膜進行抗原遞呈，可以經(jīng)過不同的免疫通路產(chǎn)生良好的免疫效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的在于提供一種非洲豬瘟病毒基因工程亞單位口服疫苗，即一種安全無毒，并能刺激機體產(chǎn)生黏膜免疫應(yīng)答的非洲豬瘟病毒基因工程亞單位口服疫苗。

本發(fā)明首先提供一種能夠用于制備非洲豬瘟病毒基因工程亞單位疫苗的抗原蛋白，所述的抗原蛋白是氨基酸序列為SEQ?ID?NO:1的ASFV?p30蛋白、氨基酸序列為SEQ?IDNO:3的ASFV?p54蛋白或氨基酸序列為SEQ?ID?NO:5的ASFV?p72蛋白；

其中編碼氨基酸序列為SEQ?ID?NO:1的ASFV?p30蛋白的基因，其序列為SEQ?IDNO:2；

編碼氨基酸序列為SEQ?ID?NO:3的ASFV?p54蛋白的基因，其序列為SEQ?ID?NO:4；

編碼氨基酸序列為SEQ?ID?NO:5的ASFV?p72蛋白的基因，其序列為SEQ?ID?NO:6；

更進一步的，所述的抗原蛋白連接有大腸埃希氏菌不耐熱腸毒素B亞單位LTB基因蛋白；

其中連接有LTB的ASFV?p30蛋白，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO:7；編碼基因的序列為SEQ?ID?NO:8；

其中連接有LTB的ASFV?p54蛋白，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO:9；編碼基因的序列為SEQ?ID?NO:10；